以殼聚糖、明膠為基質(zhì)的組織工程膜搭載黑素細(xì)胞實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：在組織工程技術(shù)的指導(dǎo)下,利用殼聚糖、明膠等組織工程材料構(gòu)建成膜,探討這幾種組織工程膜搭載、轉(zhuǎn)運(yùn)黑素細(xì)胞的可行性,為進(jìn)一步應(yīng)用于臨床治療色素脫失性疾病提供基礎(chǔ)。
　　方法：將殼聚糖、明膠等組織工程材料按照不同比例用乙酸融為凝膠,灌注于六孔細(xì)胞培養(yǎng)板中烘焙成膜;浸漬法檢測(cè)膜材料的組織相容性;透射電鏡觀察膜體的斷層結(jié)構(gòu),明確該類組織工程膜的立體形態(tài);在膜上接種經(jīng)培養(yǎng)的黑素細(xì)胞,觀察黑素細(xì)胞在膜上完成貼附所需要的時(shí)間;使用倒置顯微鏡

2、、掃描電鏡技術(shù)觀察黑素細(xì)胞在膜上貼附情況;MTT法、NaOH裂解法等方法測(cè)定黑素細(xì)胞在膜上的生長(zhǎng)以及合成黑素情況;將搭載黑素細(xì)胞的組織工程膜移植到裸鼠皮膚上,使用激光共聚焦顯微鏡和免疫組化技術(shù)檢測(cè)裸鼠移植部位的黑素細(xì)胞情況,并用熒光染色技術(shù)觀察膜上黑素細(xì)胞殘留情況,以判斷膜上黑素細(xì)胞轉(zhuǎn)移情況。
　　結(jié)果：該研究中所制作的不同比例的膜,不影響黑素細(xì)胞正常生長(zhǎng),顯示本研究中采用殼聚糖和明膠與黑素細(xì)胞具有良好的組織相容性;透射電鏡顯示殼

3、聚糖-明膠各比例混合膜膜體具有明顯的三維立體結(jié)構(gòu),而純殼聚糖膜體的三維結(jié)構(gòu)不明顯,明顯的三維立體結(jié)構(gòu)有利于含蓄培養(yǎng)液以及為黑素細(xì)胞在移植部位定植提供較好的微環(huán)境;黑素細(xì)胞能夠在3H內(nèi)在各種膜上完成貼附,其中黑素細(xì)胞在2:1比例的殼聚糖-明膠膜上貼附時(shí)間最短,2H即可有95％以上的細(xì)胞完成貼附,這可能與明膠具有很好的細(xì)胞貼附親和性有關(guān),而純殼聚糖膜上貼附時(shí)間較長(zhǎng),需要3H時(shí)間,并且在接種后的1H只有50%左右的細(xì)胞貼附;倒置顯微鏡和掃描電

4、鏡觀察到黑素細(xì)胞在聚糖膜上分布均勻,貼附良好;利用MTT法測(cè)定的增殖曲線顯示,黑素細(xì)胞在各比例的膜上均能生長(zhǎng),其中2:1比例的殼聚糖-明膠組織工程膜支持黑素細(xì)胞生長(zhǎng)情況好于其他膜,約4D時(shí)間黑素細(xì)胞可以增殖1倍,而其他種類的膜情況略差,5-6D才可以增殖1倍;NoOH裂解法測(cè)定的黑素含量增長(zhǎng)曲線與MTT曲線相同,進(jìn)一步證實(shí)了不同組織工程膜支持黑素細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的性能;激光共聚焦顯微鏡可以觀察到各組裸鼠的移植部位均含有黑素細(xì)胞,而對(duì)照部位沒