丁苯酞對蛛網膜下腔出血大鼠模型早期腦損傷的研究.pdf

1、目的：
　　蛛網膜下腔出血（subarachoid hemorrhage，SAH）是臨床上一種高死亡率和致殘率的常見疾病，約占所有卒中病例的5-7％。過去對其研究主要聚焦在SAH后的腦血管痙攣及其治療上；然而，研究表明單純治療和控制血管痙攣并不能特別有效地改善SAH的預后，近來針對SAH后早期腦損傷的研究逐漸增多，能否通過抑制SAH后早起腦損傷的發(fā)生從而降低SAH死亡率改善預后成為了研究的一個重要方向。
　　丁苯酞又名芹菜甲

2、素，最初為提取于芹菜籽的一種物質，現已人工合成其消旋體，目前主要用于急性缺血性腦卒中的治療，目前研究表明其有改善腦血流量、減輕腦水腫、保護神經，促進患者神經功能缺損的改善，作用于缺血性腦卒中所致腦損傷的多個病理生理環(huán)節(jié)，改善腦的能量代謝，抑制血栓形成，減少神經細胞凋亡的作用；SAH發(fā)生后亦有與缺血性卒中類似的微循環(huán)障礙、腦組織缺血等病理過程的發(fā)生，由于蛛網膜下腔出血發(fā)生后導致組織損傷的過程中的中也有類似的病理過程，目前少有將其應用于蛛網

3、膜下腔出血的報道，在SAH發(fā)生的情況下，其是否能對SAH的病理發(fā)展過程產生干預保護作用，改善SAH的預后，目前尚未明確。因此，本實驗通過將丁苯酞應用于 SAH大鼠模型，希望能通過檢測丙二醛（MDA）、腫瘤壞死因子α（TNF-α）、白介素1β（IL-1β）、細胞間粘附分子1（ICAM-1）以及細胞死亡情況以了解丁苯酞對SAH大鼠模型發(fā)生的早起腦損傷是否有保護作用。
　　材料和方法：
　　1、實驗材料成年SPF級SD大鼠60只，

4、其中雌性與雄性各30只，體重250~330g，由廣東省實驗動物中心提供，于廣州醫(yī)科大學實驗動物中心SPF級動物房普通飼料喂養(yǎng)1~2周后行枕大池注血法建立蛛網膜下腔出血模型。
　　2、實驗方法動物隨機分為6組，分別分假手術組、對照組、實驗組，每組又根據時點不同分為24小時組與12小時組，每組10只，每組動物中分別取5只用于獲取組織勻漿，余下5只進行制作石蠟切片。對于實驗組大鼠術后即予丁苯酞氯化鈉注射液2.5mg/kg腹腔注射，對照組

5、予等體積生理鹽水替代，空白對照組不打開蛛網膜下腔與向其中注血。按對應不同組別不同時點分別取腦組織勻漿與固定后獲取組織石蠟切片。所獲得的勻漿液利用硫代巴比妥酸（TBA）法測得MDA含量，雙抗體夾心法（ELISA）法測得大鼠TNF-α、IL-1β、ICAM-1含量，并同時利用BCA（bicinchoninic acid）法測得各標本蛋白含量進行對照。所獲得的石蠟切片利用TUNEL（Terminal deoxynucleotidyl tran

6、sferase dUTP nick end labeling），末端脫氧核苷酸轉移酶介導dUTP缺口末端標記)熒光檢測方法得到細胞凋亡情況，并經Image-Pro Plus6.0軟件處理獲得死亡細胞數及總細胞數目。各項指標檢測結果根據不同時點及是否給藥進行T檢驗及χ2檢驗來進行比較分析，設定當P<0.05時認為有統(tǒng)計學意義。
　　結果：
　　1、死亡率：假手術組術后未出現大鼠死亡，經χ2檢驗，SAH術后12小時與24小時組之

7、間p>0.05，給藥組與非給藥組之間P>0.05，無統(tǒng)計學意義。
　　2、MDA：12小時假手術組與24小時假手術組MDA含量差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。SAH術后12小時及24小時給藥組與非給藥組MDA含量均有顯著升高，各組與假手術組相比其差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），12小時給藥組與24小時給藥組，12小時對照組與24小時對照組之MDA含量有所差異，但無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。12小時給藥組較12小時對照組MDA

8、含量較低，有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。24小時給藥組較24小時對照組MDA含量亦較低。
　　3、TNF-α、IL-β及ICAM-1：假手術組12小時組與24小時組組間TNF-α測定值差異無統(tǒng)計學意義，SAH組12小時及24小時給藥組與非給藥組TNF-α測定值均有升高，各組與假手術組相比其差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），12小時與24小時組之間差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。12小時組實驗組較對照組TNF-α含量較低，有統(tǒng)計學

9、意義（P<0.05）。24小時組實驗組較對照組TNF-α含量較低，有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　兩組假手術空白對照組組間IL-1β濃度含量測定值差異無統(tǒng)計學意義，SAH組12小時及24小時給藥組與非給藥組IL-β測定值均有升高，各組與假手術組相比其差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），SAH組12小時與24小時組之間差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。12小時組實驗組較對照組IL-1β含量較低，其差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。

10、24小時組實驗組較對照組TNF-α均值較低，但其差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。
　　假手術空白對照組組間組織ICAM-1差異無統(tǒng)計學意義，SAH組12小時及24小時給藥組與非給藥組ICAM-1測定值均有升高，各組與假手術組相比其差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），SAH組12小時與24小時組之間差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。SAH12小時組與24小時組實驗組較對照組ICAM-1均值較低，其差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。<

11、br>　　4、細胞死亡：12小時與24小時空白對照組都極少見死亡細胞，12小時對照組死亡率高于12小時實驗組（P<0.05），24小時對照組死亡率高于24小時實驗組（P<0.05），24小時對照組與12小時對照組相比較其死亡率增高，但無統(tǒng)計學意義（P>0.05），24小時實驗組較12小時實驗組其死亡率較高（P<0.05）
　　結論：SAH發(fā)生后的早期，其腦組織中MDA、TNF-α、IL-β以及ICAM-1均有升高，這可能與SAH后