內質網應激在蛛網膜下腔出血后早期腦損傷中作用的研究.pdf

1、蛛網膜下腔出血（subarachnoidhemorrhageSAH）是指由于各種原因使血液進入顱內或椎管內的蛛網膜下腔。分為顱腦損傷性和自發(fā)性（非損傷性）兩大類。自發(fā)性蛛網膜下腔出血(aneurysmsubarachnoidhemorrhageaSAH)的發(fā)病率為10人/10萬人,第一次出血的死亡率為40％，第二次出血死亡率為60%。出血后幸存的患者1/3失去生活自理能力。其發(fā)病機理復雜，今年來由國外學者提出早期腦損傷（EBI）的理論。

2、但對于內質網應激(ERS)在自發(fā)性蛛網膜下腔出血后早期腦損傷中所起的作用尚不清楚。
　　目的：
　　建立大鼠自發(fā)性蛛網膜下腔出血模型，觀察海馬區(qū)神經元細胞凋亡與檢測內質網(ER)特異性因子caspase-12的時相性表達，為進一步研究內質網應激在蛛網膜下腔出血后早期腦損傷中的作用機制提供基礎理論依據。
　　方法：
　　1.通過視交叉池注入自體動脈血的方法，建立大鼠自發(fā)性蛛網膜下腔出血動物模型；
　　2.參照

3、Kaoutzanis等的行為學評分，對大鼠造模后行為學改變進行評分；
　　3.采用TUNEL法對凋亡的海馬區(qū)神經元細胞進行定量，利用RealTime-PCR技術檢測內質網特異性因子caspase-12的表達。
　　4.通過光鏡及電鏡觀察大鼠海馬區(qū)神經元細胞的動態(tài)病理變化。
　　結果：
　　1.在本模型中，利用HE染色和MASSON染色發(fā)現實驗組大鼠蛛網膜下腔內大量紅細胞，出現明顯的神經行為學癥狀；實驗組神經功能學

4、評分與空白組存在顯著差異。
　　2．大鼠在發(fā)生自發(fā)性蛛網膜下腔出血后，海馬區(qū)神經元細胞確實發(fā)生了凋亡，與3小時時間段開始表達，但對于空白組和對照組相比無統計學意義。神經元細胞在24小時時間段到達高峰，在之后的48小時時間段開始下降但對于空白組和對照組相比仍具有統計學意義（P<0.01）。72小時時間段對于空白組和對照組相比具有統計學意義(P<0.01)。
　　3.細胞形態(tài)學的改變：光鏡下可以看到空白組大鼠海馬區(qū)細胞排列有序，

5、極性好，神經元細胞輪廓清晰，大小形態(tài)好，細胞核大呈淡藍色，胞漿呈淡紅色，比例適中。實驗組大鼠海馬帶變窄，細胞排列紊亂，極性差，神經元細胞變性，細胞核變小顏色深染，胞漿比例失調，可見明顯核固縮。電鏡下可看到空白組大鼠神經元細胞大小均勻，線粒體及內質網結構清晰無擴張等病理性改變，神經纖維顯示清晰，髓鞘結構完整。突觸及突觸結構未見異常改變?？梢钥吹綄嶒灲M大鼠1小時時間段時核內異染質增多，3小時時間段核內異染質明顯增多，6小時時間段組可見胞比例

6、失調，水腫明顯。24小時時間段組可見處于凋亡時的改變，細胞核內異染質增多，核皺縮、變小，沿核膜可見齒狀突起，核內異染質增多，染色質發(fā)生了質的變化。48小時時間段組還可看到細胞處于缺血缺氧的改變，神經元細胞明顯水腫，胞漿空殼。72小時可以看到明顯的內質網擴張。
　　4.大鼠海馬區(qū)神經元細胞凋亡和caspase-12表達的關系：通過兩者相關性分析認為兩者存在相關性（P<0.05）。
　　結論：
　　1．大鼠在發(fā)生自發(fā)性蛛網

7、膜下腔出血后，海馬區(qū)神經元細胞確實發(fā)生了凋亡，3小時開始表達但對于空白組和對照組相比無統計學意義，24小時達高峰，48小時開始下降但對于空白組和對照組相比仍有統計學意義。
　　2．大鼠在發(fā)生自發(fā)性蛛網膜下腔出血后，內質網特異性因子caspase-12出現了時相性變化，24小時達高峰，72小時仍高于正常。
　　3．內質網特異性因子caspase-12的表達與海馬區(qū)神經元凋亡細胞數存在相關性。說明內質網應激在自發(fā)性蛛網膜下腔出血