基于新型納米發(fā)光和磁性材料的甲胎蛋白臨床檢測試劑盒的研發(fā).pdf

1、肝癌是一種高危險(xiǎn)性的惡性腫瘤，被稱為當(dāng)今世界的三大腫瘤殺手之一。因此，開發(fā)一種快速而廉價(jià)的檢測方法，對提前預(yù)測肝癌并及時(shí)采取治療措施顯得尤為必要。目前，預(yù)測是否患有肝癌的常用手段是檢測血清中的甲胎蛋白(Alpha-fetoprotein，稱α-FP或AFP)量。而檢測AFP濃度的常用方法為酶聯(lián)免疫沉淀分析、免疫印跡、和免疫熒光分析。然而，這些方法不但耗時(shí)耗力，而且需要經(jīng)過訓(xùn)練的專業(yè)人員進(jìn)行操作，還需要先進(jìn)的儀器設(shè)備。
　　 在過

2、去的幾十年中，半導(dǎo)體量子點(diǎn)(通常被稱為量子點(diǎn)，簡寫為QDs)CdTe已經(jīng)引起了廣泛的關(guān)注，CdTe具有的諸多優(yōu)點(diǎn)使它比傳統(tǒng)的染料具有更明顯的優(yōu)勢，更適合于生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用。同時(shí)，磁性納米粒子由于其本身特性在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用也得到推廣。但是，結(jié)合這這兩種納米粒子的本身優(yōu)勢的具體應(yīng)用還很少報(bào)道。
　　 首先，本文將闡述CdTe量子點(diǎn)的制備，并對其制備過程進(jìn)行優(yōu)化，然后把CdTe量子點(diǎn)和模型蛋白--牛血清白蛋白(BSA)--結(jié)合。

3、CdTe的制備采用巰基水相法，即利用L-型半胱胺氨酸(L-Cysteine，簡稱L-Cys)作為穩(wěn)定劑，在水相中進(jìn)行合成。同時(shí)對CdTe量子點(diǎn)的制備過程中具有至關(guān)重要作用的因素做出系統(tǒng)研究，這些因素包括反應(yīng)時(shí)間、反應(yīng)前驅(qū)體中環(huán)境pH值，反應(yīng)物濃度以及反應(yīng)物摩爾比等，并通過對這一系列反應(yīng)條件的改變，獲得制備CdTe量子點(diǎn)的最佳條件。同時(shí)，將制備出的CdTe量子點(diǎn)與模型蛋白BSA結(jié)合，觀察結(jié)合前后熒光強(qiáng)度的變化，結(jié)果顯示，CdTe量子點(diǎn)可以

4、作為一種很好的蛋白質(zhì)探針。
　　 其次，本文將闡述制備出順磁性良好的Fe3O4-dextran(右旋糖酐)磁性納米粒子，并對這種磁性納米粒子的分散性做出表征，觀察它的分散性。使用蒽酮比色法檢測Fe3O4-dextran磁性納米粒子所攜帶的右旋糖酐的量。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，1 mg的磁性納米粒子表面包含的右旋糖酐的量約為390μg，這說明Fe3O4-dextran納米粒子表面攜帶足夠的右旋糖酐，使用碘酸鉀(KIO4)將右旋糖酐的羥基氧化為醛

5、基，這樣醛基就能夠比較容易和蛋白質(zhì)的氨基相互作用生成共價(jià)鍵，最終實(shí)現(xiàn)Fe3O4納米粒子和蛋白質(zhì)分子的共價(jià)結(jié)合。這為下一步將抗體結(jié)合在Fe3O4-dextran表面打下基礎(chǔ)。
　　 最后，本文將闡述如何制備標(biāo)準(zhǔn)工作曲線、推算標(biāo)準(zhǔn)工作方程以及臨床血液樣品的分析，其步驟為：(1)將制備好的Fe3O4-dextran納米粒子氧化，然后和鼠抗人AFP抗體(記為第一抗體)進(jìn)行結(jié)合，得到“Fe3O4-第一抗體”復(fù)合物。使用這種復(fù)合物與一系列已

6、知標(biāo)準(zhǔn)濃度的抗原結(jié)合，通過磁分離對抗原進(jìn)行分離純化，得到“磁性納米粒子-第一抗體-抗原”復(fù)合物。(2)制備水溶性熒光納米粒子，并將其與另外一種鼠抗人AFP抗體(區(qū)別于第一抗體，與第一抗體識別抗原的位點(diǎn)不一樣，記為第二抗體)結(jié)合，得到“CdTe-第二抗體”復(fù)合物。(3)將“CdTe-第二抗體”復(fù)合物和“Fe3O4-第一抗體-抗原”復(fù)合物作用，得到三明治復(fù)合物。結(jié)合磁分離，洗去未結(jié)合的“CdTe-第二抗體”復(fù)合物，然后將產(chǎn)物定容至1ml并測

7、熒光，得到熒光強(qiáng)度和抗原濃度的對應(yīng)關(guān)系，繪制出“熒光強(qiáng)度-抗原濃度”工作曲線，并根據(jù)該工作曲線，算出標(biāo)準(zhǔn)工作方程：Y=k(X+4.5)/V。(4)使用同樣的方法處理臨10例床血液樣品。實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，當(dāng)血液樣本的血清中AFP含量較高的時(shí)候，本實(shí)驗(yàn)所得到的檢測結(jié)果和使用時(shí)間分辨熒光檢測所得到的結(jié)果較為相似，當(dāng)血液樣本的血清中AFP含量較低的時(shí)候，本實(shí)驗(yàn)所得到的檢測結(jié)果和使用時(shí)間分辨熒光檢測所得到的結(jié)果偏差較大。出現(xiàn)這種結(jié)果可能的原因是受到本