低硒對(duì)發(fā)育期大鼠腦中CREB及核基質(zhì)蛋白影響的研究.pdf

1、目的：觀察低硒對(duì)發(fā)育期大鼠大腦皮層和海馬的脂質(zhì)過氧化物代謝的影響,通過對(duì)轉(zhuǎn)錄因子cAMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白(CREB)含量和活性的測(cè)定,檢測(cè)大腦皮層和海馬神經(jīng)元的功能,初步探討低硒對(duì)NMPs的影響。
　　方法：利用本實(shí)驗(yàn)小組已建立的人工飼料喂養(yǎng)的三代低硒SD大鼠模型,分為對(duì)照組和低硒組。取第三代出生后21天的大鼠,雌雄不拘,經(jīng)麻醉斷頭處死后迅速取腦,在冰上分離大腦皮層和海馬組織。用硫代巴比妥酸化學(xué)法(TBARS)測(cè)定大腦皮層和海馬的

2、脂質(zhì)代謝產(chǎn)物MDA的含量(n=20)。分別提取大腦皮層和海馬的總蛋白,Western blot免疫印跡觀察CREB和Ser133磷酸化 CREB(p-CREB)的表達(dá)情況(n=16),進(jìn)一步用免疫組化的方法在組織石蠟切片觀察大腦皮層的各種類型神經(jīng)元及在海馬各區(qū)錐體細(xì)胞的表達(dá)(n=6)。提取大腦NMPs,經(jīng)初步鑒定后,進(jìn)行Western blot免疫印跡觀察p-CREB的表達(dá)(n=6)。用高效毛細(xì)管電泳(HPCE)的毛細(xì)管區(qū)帶電泳(CZE

3、)模式進(jìn)行NMPs的分離,觀察其組成成分的改變。
　　結(jié)果：測(cè)定低硒組大腦皮層MDA含量明顯高于對(duì)照組(對(duì)照組=0.31±0.13,低硒組的=0.66±0.10,P<0.05);海馬的MDA含量低硒組明顯高于對(duì)照組(對(duì)照組=0.42±0.11,低硒組=0.89±0.066,P<0.05)。提取大腦皮層和海馬的總蛋白經(jīng)Western blot免疫印跡檢測(cè),顯示低硒組CREB與p-CREB明顯低于對(duì)照組。免疫組化結(jié)果用平均灰度值表示C

4、REB在大腦皮層(對(duì)照組=119.62±8.35,低硒組=144.67±16.67,P<0.05)和海馬CA1區(qū)(對(duì)照組=123.13±6.74,低硒組=150.16±23.80,P<0.05)的表達(dá),發(fā)現(xiàn)低硒組和對(duì)照組的表達(dá)均有降低。用陽性細(xì)胞數(shù)表示p-CREB在大腦皮層(對(duì)照組=171.89±63.062,低硒組=109.44±38.41,P<0.01)海馬(對(duì)照組=28.14±9.25,低硒組=8.67±1.53 P<0.05)的

5、改變,顯示低硒組較對(duì)照組均明顯降低,且p-CREB在星形細(xì)胞中(對(duì)照組=157.17±44.80,低硒組=29.40±13.11,P<0.01)較膠質(zhì)細(xì)胞(對(duì)照組=68.80±13.78,低硒組=51.50±14.86,P>0.05)下降明顯(分別下降81.3％,25.1%)。利用高效毛細(xì)管電泳CZE分離模式能夠?qū)MPs分離出3~4個(gè)蛋白峰,波形較穩(wěn)定,進(jìn)樣9min左右有一個(gè)蛋白峰低硒組明顯低于對(duì)照組。
　　結(jié)論：(1)低硒膳食