2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:腸道微生物與人體健康息息相關(guān)。機體與腸道微生物群間存在多層面互惠互利的共生關(guān)系,腸道微生物群在幫助消化吸收、抵抗致病微生物定植,促進免疫系統(tǒng)發(fā)育和成熟上均發(fā)揮著重要作用。嬰兒期是腸道微生物群體系建立的關(guān)鍵時期。分娩方式是影響腸道微生物群的初始定植的重要因素,此時期腸道微生物群紊亂可能與遠期如過敏、肥胖等多種疾病發(fā)生風險增加有關(guān)。目前的對腸道微生物群的研究多應(yīng)用傳統(tǒng)的分子生物學技術(shù),如實時熒光定量PCR和變性梯度凝膠電泳DGGE,這

2、些方法不僅耗時而且工作量大,只能檢測出一定豐度以上的微生物,對復(fù)雜的腸道微生物群的研究不夠全面。Illumina高通量測序技術(shù)能夠測序腸道中所有微生物DNA序列,全面分析腸道微生物落的多樣性和豐度,滿足對腸道微生物群落的全面認識。本研究采用Illumina Miseq平臺對剖宮產(chǎn)兒生后腸道微生物群的初始定植和演替進行動態(tài)隨訪觀察,目的為完善和補充以往我們在此方面的研究內(nèi)容,為剖宮產(chǎn)兒腸道微生物群落的演替與遠期機體健康和疾病的關(guān)系的研究提

3、供理論依據(jù)。
  方法:收集2013年11月-2014年12月在河北醫(yī)科大學第三醫(yī)院產(chǎn)科、石家莊市第四醫(yī)院產(chǎn)科分娩的符合入選標準的足月,健康剖宮產(chǎn)兒30例。其嬰兒及雙親均生活在石家莊市或其周邊縣市,氣候環(huán)境,居住環(huán)境相當。所有入選對象均在研究開始前簽訂知情同意書,并獲河北醫(yī)科大學第三醫(yī)院倫理道德委員會同意。收集入組嬰兒出生后第1、3、7天,第1個月、3個月和6個月齡(分別設(shè)定為T1-T6組)時的糞便標本凍存于-80℃冰箱。隨訪入組

4、嬰兒各時間段的喂養(yǎng)狀況、生長發(fā)育情況以及用藥情況(抗生素及益生菌制劑)。采用E.Z.N.A.(@) Stool DNA Kit試劑盒提取嬰兒糞便微生物的總DNA,并擴增16S rRNA基因的V3+V4可變區(qū),應(yīng)用IlluminaMiseq平臺測序,全面分析腸道微生物群的構(gòu)成,豐度和多樣性。
  結(jié)果:
  1入組剖宮產(chǎn)兒共30例,分別采集生后第1、3、7天,第1個月、3個月和6個月齡時這6個時間點糞便標本,應(yīng)收集標本180份

5、,因各種原因?qū)嵅蓸颖?60份,脫落20份,脫落率為11.1%,其中編號為3、5、36、46、107、132、138,因標本DNA擴增失敗,共計153個樣本進入后續(xù)的高通量測序分析。對153份剖宮產(chǎn)兒糞便樣本測序發(fā)現(xiàn),共獲得2450420個有效序列,在經(jīng)過過濾處理后得到優(yōu)化序列數(shù)為1892051,總堿基數(shù)870289641bp,平均459.97bp。
  2稀釋曲線表明本研究測序深度足夠,能覆蓋腸道微生物群97%的菌種。多樣性分析提

6、示生后隨時間推移糞便樣本中菌群豐度及多樣性逐漸增加。
  3對153份剖宮產(chǎn)兒糞便樣本測序:在門水平上共檢測出14個菌門,其中98%-99%以上主要為厚壁菌門(Firmicutes)、放線菌門(Actinobacteria)、擬桿菌門(Bacteroidetes)、變形菌門(Proteobacteria)及Candidate division TM7五個菌門。
  430例剖宮產(chǎn)兒糞便微生物群的定植及演替:153份糞便樣品進

7、行測序共測得183個菌屬。屬水平上,T1組糞便菌群定植分布相對均勻,樣本間差異小,以乳球菌屬(Lactococcus)、芽孢桿菌屬(Bacillus)、假單胞菌屬(Pseudomonas)及Solibacillus等需氧菌和兼性厭氧菌為優(yōu)勢菌屬;T2組糞便微生物群構(gòu)成較T1組發(fā)生明顯變化,以埃希氏菌屬(Escherichia-Shigella)、克雷伯桿菌屬(Klebsiella)等兼性厭氧菌為優(yōu)勢菌群,乳球菌屬、芽孢桿菌屬等所占比例少

8、。T3組糞便標本個體間差異較大,雙歧桿菌屬(Bifidobacterium)、梭狀芽胞桿菌屬(Clostridium sensustricto)、腸球菌屬(Enterococcus)及韋榮球菌屬(Veillonella)定植增多,埃希氏菌屬(Escherichia-Shigella)、克雷伯桿菌屬(Klebsiella)定植減少。T4組糞便標本中雙歧桿菌屬(Bifidobacterium)定植增至24.5%,克雷伯桿菌屬(Klebsie

9、lla)減少至20%左右,梭狀芽胞桿菌屬(Clostridium sensustricto)占10%左右。T5組糞便標本中雙歧桿菌屬(Bifidobacterium)和埃希氏菌屬(Escherichia-Shigella)為優(yōu)勢菌屬,克雷伯桿菌屬(Klebsiella)及梭狀芽胞桿菌屬(Clostridium sensu stricto)定植減少。T6組糞便標本間菌屬分布趨于均勻,以雙歧桿菌屬為優(yōu)勢菌屬。埃希氏菌屬(Escherichi

10、a-Shigella)、克雷伯桿菌屬(Klebsiella)及梭狀芽胞桿菌屬(Clostridium sensu stricto)仍存在。
  結(jié)論:
  1 Illumina Miseq測序平臺能夠測序腸道中所有微生物DNA序列,全面分析腸道微生物落的多樣性和豐度,滿足對腸道微生物群落的全面認識。
  2對剖宮產(chǎn)兒腸道微生物群進行了全面分析:(1)在門水平上,共檢測出14個菌門,98%-99%以上主要為5個菌門,分別

11、為厚壁菌門(Firmicutes)、放線菌門(Actinobacteria)、擬桿菌門(Bacteroidetes)、變形菌門(Proteobacteria)及Candidate division TM7。(2)在屬水平上共測得183個菌屬,主要有埃希氏菌屬、雙歧桿菌屬、克雷伯氏菌屬、梭狀芽胞桿菌屬、韋榮球菌屬、乳球菌屬、芽孢桿菌屬、假單胞菌屬等。
  3動態(tài)隨訪觀察了剖宮產(chǎn)兒生后腸道微生物群的初始定植、分布和演替
  3.

12、1門水平上,剖宮產(chǎn)兒生后6個月內(nèi)優(yōu)勢菌門為厚壁菌門和變形菌門,豐度較高,其次還有放線菌門和擬桿菌門。出生后隨時間推移,厚壁菌門和放線菌門是增加的;變形菌門和擬桿菌門是降低的。
  3.2屬水平上,剖宮產(chǎn)兒出生后第1天糞便樣本已有大量細菌定植,主要為乳球菌屬、芽孢桿菌屬及假單胞菌屬等需氧菌和兼性厭氧菌,其大量生長繁殖消耗消化道內(nèi)大量氧氣,降低了腸道內(nèi)酸堿度和氧化還原電位,為后期厭氧菌的定植打下基礎(chǔ),也表現(xiàn)出后期需氧菌和兼性厭氧菌定植

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