柴胡疏肝散及拆方對抑郁模型大鼠行為學和腦組織p38MAPK、ERK5表達的影響.pdf

1、目的:
　　觀察柴胡疏肝散及拆方對慢性應激抑郁模型大鼠行為學及額葉皮質、海馬p38絲裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)和細胞外信號調(diào)節(jié)激酶5(ERK5)表達的影響，探討柴胡疏肝散抗抑郁效果及其作用機制。
　　方法:
　　1.將健康成年雄性SD大鼠隨機分六組:①正常組、②抑郁模型組、③柴胡疏肝散全方組（CHSGS組）、④柴胡疏肝散拆方Ⅰ組（拆方Ⅰ組）、⑤柴胡疏肝散拆方Ⅱ組（拆方Ⅱ組）、⑥氟西汀組。
　　2.采用慢性

2、輕度不可預見性應激(CUMS)建立抑郁大鼠模型。并給予相應藥物灌胃。
　　3.分別于造模第1天（應激前）、14天及28天測量各組大鼠體重、觀察敞箱試驗和糖水消耗試驗各項行為學指標變化。
　　4.采用放射免疫方法測定各組大鼠血清腫瘤壞死因子(TNF-α)、白細胞介素-6(IL-6)含量。
　　5.應用免疫組織化學法及蛋白質印跡技術(Western-blotting)檢測各組大鼠額葉皮質、海馬p38MAPK、ERK5的分布

3、、表達及磷酸化水平差異。
　　6.應用實時熒光定量Real-Time PCR技術測定各組大鼠額葉、海馬p38 MAPK mRNA、ERK5 mRNA的表達差異。
　　結果:
　　1.實驗第1天各組大鼠體重及行為學指標無明顯差別，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。經(jīng)過14-28天CUMS，模型組大鼠體重增加緩慢。敞箱試驗中水平運動、垂直運動得分減少;清潔動作次數(shù)減少;中央格停留時間延長。總液體消耗、糖水消耗明顯減少，糖水

4、偏愛百分比明顯降低。與正常組比較，差異均具有顯著性(P＜0.01)。
　　2.經(jīng)14天灌胃，與模型組相比，CHSGS組大鼠體重增加;水平運動、垂直運動得分及清潔動作次數(shù)增加，中央格停留時間明顯減少;糖水消耗量及糖水偏愛百分比增加，差異均具有顯著性(P＜0.01或P＜0.05)。拆方Ⅰ組、拆方Ⅱ組、氟西汀組各項指標與模型組相比，差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。經(jīng)28天灌胃，CHSGS組及氟西汀組與模型組比較，大鼠體重明顯增加，行

5、為學各項指標明顯改善，差異有顯著性(P＜0.01或P＜0.05)。拆方Ⅰ及Ⅱ組同模型組相比，僅部分測量指標改善(P＜0.05或P＜0.01)。CHSGS組與氟西汀組各項指標比較，差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　3.模型組大鼠血清TNF-α、IL-6含量明顯升高。與正常組相比，差異具有顯著統(tǒng)計意義(P＜0.01)。CHSGS組、氟西汀組與模型組相比TNF-α、IL-6水平降低，差異均有顯著統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。拆方Ⅰ

6、、Ⅱ組與模型組相比，TNF-α水平無明顯改變，差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。拆方Ⅰ組IL-6水平降低，同模型組相比，差異有顯著性(P＜0.05)。
　　4.免疫組化結果顯示:p38MAPK及ERK5免疫反應陽性細胞在各組大鼠額葉、海馬均有表達。與正常組比較，模型組額葉及海馬p38 MAPK表達增加，灰度值降低，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。與模型組比較，CHSGS組和氟西汀組額葉、海馬p38MAPK表達減少，灰度值增加（

7、P＜0.05或P＜0.01）。拆方Ⅰ、Ⅱ組大鼠海馬p38MAPK表達與模型組相比，差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。各組大鼠額葉、海馬組織ERK5免疫反應陽性細胞數(shù)改變不明顯，平均灰度值比較，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。Western-blotting定量分析顯示:與正常組比較，模型組額葉、海馬p38、p-p38MAPK，p-p38/p38MAPK均明顯增加，差異具有顯著性(P＜0.05或P＜0.01)。與模型組比較，CHSGS

8、組和氟西汀組額葉、海馬p38、p-p38及p-p38/p38MAPK均降低(P＜0.05)。拆方Ⅰ、Ⅱ組與模型組比較，額葉及海馬p38、p-p38及p-p38/p38MAPK均無明顯差別，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。各組大鼠額葉及海馬ERK5蛋白表達量均無明顯變化(P＞0.05)。模型組大鼠額葉及海馬p-ERK5、p-ERK5/ERK5水平明顯降低，與正常組比較，差異具有顯著性（P＜0.01或P＜0.05）。與模型組相比，CHSG

9、S組額葉及海馬p-ERK5、p-ERK5/ERK5明顯增加;氟西汀組海馬p-ERK5、額葉及海馬p-ERK5/ERK5增加，同模型組比較，差異均具有顯著性(P＜0.05或P＜0.01)。拆方Ⅰ組及Ⅱ組p-ERK5、p-ERK5/ERK5水平降低，與模型組相比，差異均無顯著性(P＞0.05)。
　　5.RT-PCR結果示:各組大鼠額葉、海馬均可見p38 MAPK、ERK5的mRNA表達。模型組額葉、海馬p38MAPK mRNA表達量

10、較正常組上調(diào)，兩者差異具有顯著性（P＜0.05或P＜0.01）。CHSGS組、拆方Ⅰ、Ⅱ組及氟西汀組額葉p38MAPK mRNA表達量與模型組相比，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。與模型組相比，CHSGS組及氟西汀組大鼠海馬p38MAPK mRNA表達量降低，差異具有顯著性(P＜0.05)。各組大鼠額葉皮質及海馬ERK5 mRNA表達量比較，差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　結論:
　　1.抑郁模型組大鼠體重增加緩

11、慢、各項行為學指標明顯異于正常組，說明抑郁模型大鼠食欲減退，體重減輕，興趣及快感喪失，活動減退，與臨床抑郁癥狀相似。經(jīng)氟西汀抗抑郁治療后上述行為明顯改善，證明抑郁模型復制成功。
　　2.柴胡疏肝散可逆轉各項異常抑郁樣測量指標，說明其具有抗抑郁作用。其抗抑郁效果與氟西汀相當且起效快。柴胡疏肝散全方抗抑郁效果優(yōu)于其拆方Ⅰ、Ⅱ。提示疏肝解郁在抗抑郁治療中的重要作用;并認為柔肝活血能加強疏肝解郁的功效。
　　3.抑郁大鼠血清炎性因子