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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:建立實(shí)驗(yàn)性自身免疫性重癥肌無(wú)力(Experimentalautoimmune myasthenia gravis EAMG)小鼠模型,觀察antagomiR-155治療對(duì)B細(xì)胞活化、增殖及抗體分泌的影響,探討antagomiR-155治療EAMG小鼠可能的作用機(jī)制。
方法:采用電鰻乙酰膽堿受體(Torpede AchR,T-AchR)片段97-116免疫6-8周齡C57BL/6小鼠建立MG模型,初次免疫后第30、60天時(shí)
2、加強(qiáng)免疫,70 d時(shí)作模型評(píng)價(jià)。將EAMG小鼠隨機(jī)分為PBS組、對(duì)照組和AntagomiR155治療組。對(duì)照組給予antagomiR-155結(jié)構(gòu)相似的無(wú)意義片段鏈,antagomiR-155組給予antagomiR-155作為治療。治療后第5天收集小鼠外周血、脾臟,免疫磁珠分選技術(shù)分選出T、B淋巴細(xì)胞,生物熒光染料CFSE法標(biāo)記并流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng),流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定記憶性B細(xì)胞、漿細(xì)胞的比例及B細(xì)胞表面活化分子CD40、CD8
3、0及CD86表達(dá)水平變化。ELISA法檢測(cè)小鼠外周血清抗AChR抗體IgG及其亞型IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG2c、IgG3分泌水平。熒光定量RT-PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)錄因子p38MAPK和轉(zhuǎn)錄因子C/EBPβ表達(dá)水平的變化。
結(jié)果:(1)與PBS組及對(duì)照組相比,antagomiR-155組小鼠外周血中IgG、IgG1的分泌水平顯著降低(P<0.001),三組小鼠IgG2a、IgG2b、IgG2c、IgG3抗體分泌水平差異
4、無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
(2)與PBS組及對(duì)照組相比,antagomiR-155組小鼠脾臟漿細(xì)胞及記憶性B細(xì)胞的陽(yáng)性表達(dá)率降低(P=0.029,P<0.001)。PBS組與對(duì)照組的小鼠脾臟漿細(xì)胞及記憶性B細(xì)胞陽(yáng)性表達(dá)率無(wú)顯著差異。
(3) antagomiR-155組小鼠較PBS組及對(duì)照組的CD40、CD86表達(dá)水平顯著升高;三組間CD80的表達(dá)水平無(wú)顯著差異。
(4) T-AchR、乙酰膽堿受體片
5、段R97-116刺激后,antagomiR-155組較PBS組及對(duì)照組B細(xì)胞的增殖反應(yīng)顯著減弱,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;刀豆蛋白ConA刺激后各組均發(fā)生了增殖反應(yīng),三組間比較無(wú)顯著差異;血清培養(yǎng)后B細(xì)胞各組均未發(fā)生增殖反應(yīng),三組間比較無(wú)顯著差異。
(5) antagomiR-155治療組較PBS組及對(duì)照組的p38MAPK表達(dá)水平顯著低(P<0.001),C/EBPβ表達(dá)水平在各組間無(wú)明顯差異(P>0.05)。
結(jié)論:anta
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