利用P53抗體進(jìn)行腫瘤檢測(cè)的ELISA方法的建立及臨床檢測(cè)研究.pdf

1、人類(lèi)p53基因存在于17號(hào)染色體p13.1，它是迄今發(fā)現(xiàn)的與人類(lèi)腫瘤相關(guān)性最高的基因，存在野生型和突變型兩種類(lèi)型。突變的p53基因編碼產(chǎn)生的突變的P53蛋白半衰期延長(zhǎng)，蛋白的穩(wěn)定性大大增加。腫瘤細(xì)胞內(nèi)積累的P53蛋白可釋放到細(xì)胞外進(jìn)入血液循環(huán)，進(jìn)而刺激機(jī)體產(chǎn)生血清P53抗體。大部分P53抗體既能識(shí)別野生型P53蛋白也能識(shí)別突變的P53蛋白。 大多數(shù)研究認(rèn)為，血清P53抗體水平與腫瘤組織p53基因突變及P53蛋白積累程度相一致。由

2、于p53基因和P53蛋白的檢測(cè)，都需要使用腫瘤組織，方法復(fù)雜，昂貴費(fèi)時(shí)，很難在臨床上推廣，而血清P53抗體的檢測(cè)具有取材方便、靈敏快捷、無(wú)創(chuàng)傷性和可重復(fù)檢測(cè)等優(yōu)點(diǎn)，因此檢測(cè)血清P53抗體可成為一種快速便捷的了解p53基因突變及P53蛋白積累的方法。血清P53抗體在腫瘤的早期診斷、判斷預(yù)后，監(jiān)測(cè)復(fù)發(fā)、指導(dǎo)治療以及高危人群篩查方面都有一定的價(jià)值，是一種很有前途的腫瘤生物學(xué)指標(biāo)。 本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)了兩套血清P53抗體的ELISA檢測(cè)系統(tǒng)，分

3、別使用本實(shí)驗(yàn)室保存的野生型P53蛋白和展示P53蛋白優(yōu)勢(shì)表位SQAMDDLMLS的雜合噬菌體作為包被抗原，優(yōu)化ELISA方法，對(duì)400名健康人、1003名惡性腫瘤患者和1162名體檢人員血清進(jìn)行了檢測(cè)，確定了各自的靈敏度及特異度，并在61名胃癌患者中較為詳細(xì)地研究了血清P53抗體的臨床意義。結(jié)果表明：1)以全長(zhǎng)P53蛋白作為固相包被抗原進(jìn)行ELISA檢測(cè)時(shí)，特異度和靈敏度分別為95％和25.52％，以雜合噬菌體作為固相包被抗原進(jìn)行ELI

4、SA檢測(cè)時(shí)，特異度和靈敏度分別為95.25％和11.27％；2)上述兩種ELISA檢測(cè)體系聯(lián)合使用可以提高血清P53抗體檢測(cè)的靈敏度；3)對(duì)胃癌患者的研究表明，血清P53抗體與胃癌患者腫瘤大小呈正相關(guān)，可作為胃癌患者預(yù)后不良的生物學(xué)指標(biāo)。 通過(guò)以上研究，說(shuō)明以全長(zhǎng)P53蛋白及展示P53蛋白表位的雜合噬菌體作為固相抗原進(jìn)行血清P53抗體檢測(cè)的兩種ELISA檢測(cè)系統(tǒng)已構(gòu)建成功，并初步證實(shí)了血清P53抗體在腫瘤患者中的臨床意義，有望為