環(huán)境因子和外源刺激對櫛孔扇貝免疫活性的影響.pdf

1、近年來，貝類大規(guī)模死亡現(xiàn)象頻繁發(fā)生，病害日益嚴重，已成為制約貝類養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的瓶頸問題。貝類的免疫防御系統(tǒng)在疾病防御過程中扮演著極為重要的角色，因此貝類免疫學的研究對解決貝類養(yǎng)殖中的病害問題具有重要意義。本文研究了環(huán)境因子變化和外源刺激對櫛孔扇貝(Chlamysfarreri)免疫活性的影響，以期從免疫學角度了解貝類的防御機制，為扇貝病害防治提供資料。研究結(jié)果如下： (1)分別用不同濃度(0，0.02，0.05，0.1和0.2mg

2、/L)的Cu2+溶液對櫛孔扇貝浸浴7d后，檢測了活性氧(ROIs)的產(chǎn)生情況；同時測定了過氧化氫酶(CAT)、酸性磷酸酶(ACP)和堿性磷酸酶(ALP)的活性。結(jié)果表明，當Cu2+在0.02mg/L、0.05mg/L、0.1mg/L三種濃度條件下，ACP和ALP活性均高于對照組，但隨著Cu2+濃度增加酶活有降低的趨勢，當Cu2+濃度達到0.2mg/L時這2種酶活性均低于對照組。各實驗組CAT活性均高于對照組，且隨著Cu2+濃度增加而升高

3、；活性氧含量的變化趨勢與CAT活性變化趨勢相似。實驗結(jié)果說明Cu2+對櫛孔扇貝的免疫活性有明顯的刺激作用，且存在劑量依賴性。 (2)研究了不同濃度(1.25、2.5、5.0、10、20和40mg/L)氨氮脅迫7d后櫛孔扇貝血淋巴中胞內(nèi)胞外活性氧自由基(ROIs)含量、SOD和CAT活性的變化。結(jié)果表明，在較低濃度氨氮脅迫下，胞內(nèi)胞外活性氧含量都隨氨氮濃度升高而增加，當濃度繼續(xù)增加到20～40mg/L時，胞內(nèi)外活性氧含量都明顯下降

4、且低于對照組；不同氨氮濃度下SOD和CAT活性也不同，當氨氮濃度為1.25～20mg/L時，CAT活性隨氨氮濃度增加而升高，當濃度增大到40mg/L時，CAT活性明顯下降且低于對照組；當氨氮濃度為1.25～5mg/L時，SOD活性隨氨氮濃度增加而升高，而當濃度為10～40mg/L時，酶活性顯著下降。實驗結(jié)果說明，適當?shù)陌钡碳た稍黾影麅?nèi)外活性氧的含量，增強扇貝的兩種抗氧化酶活性，但較高濃度氨氮則使胞內(nèi)外活性氧的含量顯著下降并明顯抑制抗氧

5、化酶的活性。 (3)利用不同pH(7.0,7.3,7.6,8.5,9.0)環(huán)境脅迫7d后，櫛孔扇貝體內(nèi)ACP、ALP、SOD和CAT及胞內(nèi)活性氧含量(ROIs)等五種免疫指標有明顯變化。結(jié)果表明：在實驗范圍內(nèi)，當pH高于正常組(pH8.0)時，上述五種免疫指標均隨pH值的增加而明顯升高；當pH低于正常組時，四種酶活性均呈先上升后下降的趨勢。ACP在pH7.6時酶活性上升至峰值，隨后酶活性降低；ALP、SOD和CAT活性均在pH7

6、.3時達峰值，隨后酶活性降低；而胞內(nèi)活性氧含量則隨pH降低持續(xù)增加。實驗結(jié)果說明，pH對櫛孔扇貝免疫活性有明顯的刺激作用，且在一定范圍內(nèi)隨刺激強度的增加呈現(xiàn)免疫活性的正調(diào)節(jié)；但在高強度pH刺激下，扇貝免疫活性呈現(xiàn)出負調(diào)節(jié)，這種負調(diào)節(jié)可能與高強度刺激引起的免疫機能疲勞或損傷有關。 (4)測定了鰻弧菌(2×108cell/ml)注射對櫛孔扇貝胞內(nèi)活性氧含量和CAT,ACP和ALP活性的影響。結(jié)果表明，在注射后5h，24h，48h和7

7、2h各免疫指標都有明顯變化：胞內(nèi)活性氧含量在24h、48h和72h明顯升高，且均高于對照組，形成拋物線趨勢，在48h達到最高；血清中CAT活性均有升高趨勢，但差異不顯著；肝臟中ACP活性在24h、48h和72h與注射生理鹽水組相比明顯升高；櫛孔扇貝體內(nèi)ALP活性有明顯升高的趨勢，且在注射后24h活性達到最高，而后有所下降。結(jié)果表明，鰻弧菌對櫛孔扇貝免疫系統(tǒng)有明顯的刺激作用。 (5)研究了注射不同劑量(20ug/g和40ug/g)

8、Vc對櫛孔扇貝體內(nèi)5種參與免疫防御的水解酶和抗氧化酶活性的影響。結(jié)果表明，注射Vc劑量為20ug/g和40ug/g時，在注射后12h、24h和48h，兩實驗組櫛孔扇貝體內(nèi)溶菌酶(LSZ)、ACP和ALP活性都明顯升高，而SOD和CAT活性均明顯降低。同時本實驗發(fā)現(xiàn)，Vc對40ug/g組各種酶的刺激作用與20ug/g組相比存在明顯滯后性，說明40ug/g的劑量已對櫛孔扇貝產(chǎn)生毒性，需經(jīng)代謝消耗一部分后才能達到最適劑量，起到抗氧化作用。本研

9、究表明，Vc可有效增強櫛孔扇貝的免疫活性，且因劑量不同而有差異。 綜合本論文的研究結(jié)果表明，環(huán)境因子(Cu2+、氨氮、pH)變化和外源刺激對櫛孔扇貝免疫活性均有明顯影響?？傮w來講，較低水平的環(huán)境變化和刺激能使櫛孔扇貝體內(nèi)各免疫因子活性升高，較高水平的環(huán)境變化和刺激使櫛孔扇貝體內(nèi)各免疫因子活性降低。但較低水平刺激下免疫活性的升高并不完全意味著免疫機能的增強或者對機體有利，而相反可能是機體在條件變化下的一種免疫代償或者是毒物興奮效應