鉑(Ⅱ)配合物——抗體偶聯(lián)物的制備、表征及評(píng)價(jià).pdf

1、惡性腫瘤嚴(yán)重威脅著人類的身體健康，其治療也成為人們關(guān)注的焦點(diǎn)。目前，鉑類抗腫瘤藥物是癌癥化療藥物中的重要組成部分。盡管鉑類抗腫瘤藥物的研制與應(yīng)用已取得很大進(jìn)展，但毒副作用強(qiáng)、生物利用度低及耐藥性等缺點(diǎn)常限制其臨床應(yīng)用。靶向給藥由于可以將藥物選擇性地傳遞至靶部位，提高藥物在病灶上的濃度，同時(shí)減少在正常組織細(xì)胞中的累積，是降低藥物毒性和提高療效的最有效方法之一，而且靶向給藥由于改變了細(xì)胞對(duì)藥物的攝取方式，從而克服了癌細(xì)胞對(duì)鉑類藥物的耐藥性。

2、因此，鉑類抗腫瘤藥物的靶向給藥一直是國內(nèi)外關(guān)注和研究的熱點(diǎn)。
　　 抗體-藥物偶聯(lián)物(ADCs)，亦稱為免疫偶聯(lián)物，由抗體、藥物以及偶聯(lián)抗體和藥物的連接鍵三部分組成，是靶向藥物的一種。抗體由于自身的抗體抗原識(shí)別能力而具有天然的靶向性，但沒有或僅有微量的抗腫瘤作用，而鉑類抗腫瘤藥物卻由于缺少靶向性而帶來嚴(yán)重的毒副作用。因此，將兩者進(jìn)行偶聯(lián)就能獲得既有細(xì)胞毒性又有靶向性的新型鉑類抗腫瘤藥物?；谝陨显?，本論文選擇具有高度靶向性的生

3、物活性物質(zhì)——單克隆抗體作為載體，制備了鉑(Ⅱ)配合物-抗體偶聯(lián)物來進(jìn)行鉑藥的靶向運(yùn)輸。
　　 本論文的主要研究工作如下:
　　 (1)根據(jù)已上市鉑藥的構(gòu)效關(guān)系的研究總結(jié)，設(shè)計(jì)出了一種新型的鉑(Ⅱ)配合物。該鉑(Ⅱ)配合物以反式-1，2-環(huán)己二胺作為氨基配體，以具有一定的親脂性和適中的水解速度的谷氨酸作為離去基團(tuán)部分。其中，谷氨酸結(jié)構(gòu)中的氨基作為與抗體偶聯(lián)的合適的化學(xué)反應(yīng)位點(diǎn)。以氯亞鉑酸鉀、反式-1，2-環(huán)己二胺、谷氨酸

4、為原料，合成了鉑(Ⅱ)配合物Pt(DACH)(Glu)，并用MS、1H-NMR、IR進(jìn)行了表征。
　　 (2)根據(jù)常見的偶聯(lián)劑的結(jié)構(gòu)分析，設(shè)計(jì)出了一種兩端具有活性不同的羧基的偶聯(lián)劑Linker，可分別作為與鉑(Ⅱ)配合物和抗體上的氨基反應(yīng)的結(jié)合位點(diǎn)。這樣，偶聯(lián)物在體液的中性環(huán)境中穩(wěn)定，而當(dāng)?shù)竭_(dá)靶部位時(shí)，由于腫瘤組織呈弱酸性，偶聯(lián)物就會(huì)水解釋放出藥物。以間氨基苯甲酸、N-羥基琥珀酰亞胺、馬來酸酐為原料，合成了偶聯(lián)劑Linker，并

5、用MS、1H-NMR、IR進(jìn)行了表征。
　　 (3)以腫瘤細(xì)胞表面高表達(dá)的c-Met為靶點(diǎn)，通過偶聯(lián)劑Linker將鉑(Ⅱ)配合物Pt(DACH)(Glu)和Met抗體進(jìn)行偶聯(lián)，制備了Pt(DACH)(Glu)—Met抗體偶聯(lián)物，并用透析法對(duì)合成的偶聯(lián)物進(jìn)行了純化。用紫外可見分光光度法測定了偶聯(lián)物中鉑(Ⅱ)配合物和抗體的分子比。
　　 (4)對(duì)偶聯(lián)物進(jìn)行了體外藥物釋放研究，并繪制了偶聯(lián)物的釋藥曲線;采用ELISA法測定了