2ME抑制高血壓和Up4A誘導(dǎo)胃平滑肌收縮的機制.pdf

1、第一部分、雌激素代謝產(chǎn)物2-甲氧雌二醇治療DOCA-鹽大鼠高血壓
　　目的:使用低雌激素受體親和性的雌激素代謝產(chǎn)物治療高血壓，具有降低女性化等副作用的優(yōu)勢。2-甲氧雌二醇(2MEthoxyestradiol，2ME))最早發(fā)現(xiàn)于妊娠婦女的尿液中，是雌二醇在細(xì)胞色素P450及兒茶酚-O-甲基轉(zhuǎn)移酶等作用下，先羥基化再甲基化形成的一種主要代謝產(chǎn)物。我們先前的研究表明，2ME可以通過內(nèi)皮依賴機制抑制血管平滑肌增殖和血管收縮。本研究的目的

2、是探討2ME是否可以治療大鼠高血壓。
　　方法:利用單側(cè)腎摘除和注射醋酸脫氧皮質(zhì)酮，輔以高鹽飲食的方法獲得高血壓大鼠模型—DOCA-鹽大鼠。利用tail cuff方法實時監(jiān)測2ME對DOCA-鹽大鼠收縮壓變化的影響（在血壓升高前注射或在血壓升高過程中注射）。使用Power Lab系統(tǒng)測量DOCA-鹽大鼠的平均動脈壓，并檢測2ME對其急性降血壓的作用。利用兒茶酚-O-甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑恩他卡朋處理DOCA-鹽大鼠，實時監(jiān)測DOCA-鹽

3、大鼠收縮壓變化并檢測其平均動脈壓。
　　結(jié)果:我們的結(jié)果顯示，用DOCA處理大鼠，可使其收縮壓在3-10周明顯上升。而用DOCA和2ME(100-300μg/kg)共同處理大鼠，可阻止大鼠血壓上升。2ME處理十周后利用Power Lab Data Acquisition System測得的假手術(shù)對照組大鼠平均動脈壓為84±16mmHg，DOCA-鹽大鼠的平均動脈壓為150±9 mmHg。使用低劑量或高劑量2ME處理的大鼠，其血壓接

4、近假手術(shù)對照組。同時使用恩他卡朋抑制內(nèi)源性2ME生成，并不能明顯影響各組大鼠的血壓。
　　結(jié)論:2ME處理可以阻止DOCA-鹽大鼠血壓升高，顯示了2ME在高血壓治療方面的潛在能力。
　　第二部分、Up4A引起大鼠胃平滑肌收縮的機理
　　目的:細(xì)胞外核苷ATP和UTP可以誘導(dǎo)胃平滑肌收縮，最近發(fā)現(xiàn)尿苷腺苷四磷酸鹽(Up4A)，是一種可以誘導(dǎo)血管平滑肌收縮的內(nèi)皮衍生的收縮因子，但它對胃平滑肌是否具有收縮能力尚未可知。我們假

5、設(shè)Up4A通過不同機制在胃縱行平滑肌(LM)和胃環(huán)行平滑肌(CM)中引發(fā)收縮反應(yīng)。為此檢測P2X和P2Y受體拮抗劑，P2X受體激活劑，Rho激酶抑制劑以及環(huán)氧合酶抑制劑(IP5I，Suramin，α，β-Me-ATP，Y-27632和吲哚美辛)對Up4A在LM和CM中引發(fā)的收縮反應(yīng)的影響。
　　方法:獲取大鼠全胃，分離LM和CM，使用organ bath系統(tǒng)測量平滑肌收縮。利用50mM KCl作為收縮基準(zhǔn)，使用Up4A產(chǎn)生收縮，再

6、分別使用鈣離子通道拮抗劑尼莫地平，IP5I，Suramin，α，β-Me-ATP，Y-27632和吲哚美辛孵育，檢測這些藥物對Up4A在LM和CM中的收縮是否具有不同的影響。
　　合成P2X和P2Y引物，使用RT-PCR檢測P2X受體和P2Y受體在大鼠胃平滑肌中的表達狀況。
　　結(jié)果:Up4A可以在LM和CM中引起與ATP和UTP類似的收縮;Up4A對LM和CM的收縮需鈣離子通道參與，使用尼莫地平孵育，不能使Up4A誘發(fā)LM

7、和CM收縮，IP5I和α，β-Me-ATP對LM和CM中由Up4A引起的收縮并無影響，α，β-Me-ATP本身也不能引起大鼠胃平滑肌收縮;但Y-27632，Suramin和吲哚美辛則能在CM中顯著抑制由Up4A引起的收縮，而LM中無此現(xiàn)象。RT-PCR結(jié)果顯示，P2X1，2，4，5，7以及P2Y1，2，4，6在大鼠胃平滑肌中均有表達。
　　結(jié)論: Up4A通過細(xì)胞外Ca2+可以引發(fā)大鼠胃LM和CM的收縮。Up4A在CM中引發(fā)的收縮