類維生素A對自發(fā)性高血壓大鼠心肌、血管平滑肌增殖的作用及其機制.pdf

1、1.背景與目的 類維生素A(維甲酸、ATRA)對心血管系統(tǒng)發(fā)育、成熟有重要作用，同時它對多種細胞具有抑制增殖的作用。近年來，ATRA對血管平滑肌(VSMC)增殖的抑制作用備受關(guān)注，但其對高血壓病引起的平滑肌增殖是否有相應的抗增殖作用尚不清楚。血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ACE)和血管緊張素轉(zhuǎn)換酶2(ACE2)是作用于腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)(RAS)而其效應相反的兩個關(guān)鍵酶，ACE是一種鋅依賴性膜金屬蛋白酶，在其作用下產(chǎn)生的血管緊張素

2、Ⅱ(AngⅡ)具有血管收縮、促進細胞增殖等作用；ACE2也是鋅依賴性膜金屬蛋白酶，是ACE同源物，能產(chǎn)生擴血管的血管緊張素(1-7)(Ang-[1-7])并水解具有縮血管作用的血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)而起降壓作用。因此它們在高血壓病的發(fā)生、發(fā)展及維持中起著重要作用。有研究發(fā)現(xiàn)ATRA對RAS各種產(chǎn)物的轉(zhuǎn)錄、表達有作用，但其作用機制還不清楚，是否與這兩個關(guān)鍵酶有關(guān)，目前還沒有被證實。本研究通過觀察ATRA對SHR心肌、血管平滑肌增殖和SH

3、R心肌ACE-mRNA、ACE-2mRNA表達的影響，擬探討ATRA是否對高血壓病的血管增殖有抑制作用及其在高血壓病中的作用機制。 2.方法 實驗用18只15周齡雄性SHR大鼠，隨機分為三組：①維甲酸處理組；②溶媒對照組；③卡托普利處理組，每組各6只。各組大鼠給予SHR鼠專用飼料并自由進食、飲水。處理組給予全反式維甲酸(alltrans-retinoicacid)處理，全反式維甲酸避光溶于5％二甲亞砜(DMSO)和95％

4、花生油，10mg·Kg-1體重皮下注射，每天1次；對照組給予每天皮下注射上述溶媒作為對照；卡托普利處理組給予卡托普利0.25mg·Kg-1管飼，療程均為4周。第29天處理大鼠時，大鼠麻醉后腹主動脈穿刺放血，于主動脈根部分離主動脈，同時取心臟左室心肌組織，均以4％多聚甲醛固定，石蠟包埋用免疫組織化學染色觀察各組SHR大鼠心肌、血管平滑肌(VSMC)增殖細胞核抗原(PCNA)的變化。部分左室心肌組織-70℃凍存供逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應測心肌A

5、CE-mRNA、ACE2-mRNA的表達。 3.結(jié)果 1.溶媒對照組SHR的血漿AngⅡ明顯增高，維甲酸組與卡托普利組的血漿AngⅡ較溶酶對照組明顯減低(P＜0.01)，而兩組之間比較則無明顯差異(P＞0.05)。 2.HE染色光鏡下檢查：對心肌切片觀察各組未見明顯差異，心肌細胞均排列整齊，細胞間隙正常，無心肌纖維的破壞；對血管切片觀察見對照組血管平滑肌略厚，細胞略顯多；維甲酸組及卡托普利組則無明顯增厚，細胞排列

6、整齊。 3.免疫組化染色觀察SHR大鼠心肌、血管平滑肌(VSMC)增殖細胞核抗原(PCNA)的變化。免疫組化染色鏡檢陽性信號呈紅色核表達。定量分析發(fā)現(xiàn)，ATRA組PCNA陽性染色顯著低于卡托普利組及對照組(P＜0.01)，而卡托普利組與對照組之間亦有顯著性差異(P＜0.01)。 4.RT-PCR用以檢測心肌ACE-mRNA、ACE2-mRNA的表達。ATRA組SHR大鼠ACE-mRNA表達和ACE2-mRNA表達水平較對

7、照組及卡托普利處理組均有明顯差異(P＜0.01)，卡托普利處理組與對照組比較，ACE-mRNA表達和ACE2-mRNA表達均無明顯差異(P＞0.05)。 4.結(jié)論 1.對照組SHR血漿AngⅡ明顯增高，而維甲酸和卡托普利處理可以明顯降低SHR的血漿AngⅡ。其原因是卡托普利抑制了ACE的活性，從而抑制AngⅠ向AngH轉(zhuǎn)換，也就減少了循環(huán)及局部組織中的升壓活性物質(zhì)AngⅡ。而維甲酸使SHR血漿AngⅡ下降則是因為維甲酸通

8、過影響腎素—血管緊張素系統(tǒng)(RAS)的多方面基因表達，最終降低血漿AngⅡ，從而達到抑制心血管重塑的作用。 2.維甲酸和卡托普利處理28天后的心肌和大血管在HE染色光鏡下觀察其病理改變不明顯。這可能與觀察時間不長有關(guān)。 3.維甲酸、卡托普利可以抑制SHR心肌和血管平滑肌PCNA的表達，提示它們能有效抑制心血管平滑肌增殖；這種作用ATRA較卡托普利更明顯，其機制可能是其對AngⅡ具有更強的抑制作用。 4.維甲酸上調(diào)

9、ACE2-mRNA的表達而抑制ACE-mRNA表達，說明其通過調(diào)控RAS發(fā)揮有利的心血管功能調(diào)節(jié)作用，從而緩解高血壓病的發(fā)生、發(fā)展，進而控制心血管重塑。 總之，本實驗在SHR的模型上，證實了ATRA處理能有效抑制心血管平滑肌增殖，此作用機制可能在RAS的多個環(huán)節(jié)。也就是說，ATRA分別通過對ACE、ACE2、AngⅡ的作用，最終降低了血漿AngⅡ，增加了擴血管物質(zhì)Ang-(1-7)，因而不僅能夠緩解不利的心血管重塑，還可能籍以上