潰結(jié)安對大鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型中NF-κB基因表達(dá)的影響及RNAi技術(shù)平臺(tái)的建立.pdf

1、目的：研究維藥西帕依潰結(jié)安對大鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型NF-кB 基因表達(dá)的影響，建立RNAi技術(shù)平臺(tái)，探討潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病的敏感點(diǎn)及維藥西帕依潰結(jié)安治療潰瘍性結(jié)腸炎的作用靶點(diǎn)。 方法：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為正常組，潰瘍性結(jié)腸炎模型組，西帕依潰結(jié)安干預(yù)組，5-氨基水楊酸(5-ASA)陽性對照組，生理鹽水(NS)陰性對照組；采用DNCB和乙酸復(fù)合法建立大鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型；通過半定量RT-PCR分析NF-婦mRNA的表達(dá)水平；克隆大鼠NF-кB的

2、完整編碼區(qū)，與pcDNA3.1/CT-GFP-TOPO載體連接，構(gòu)建pcDNA3.1/CT-GFP-TOPO-NF-кB真核表達(dá)載體；設(shè)計(jì)針對NF-кB基因的siRNA模板與pSilencer 1.0-U6載體連接，構(gòu)建pSilencer 1.0-U6-siRNA-NF-кB干擾載體；通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法，在COS-7細(xì)胞中表達(dá)NF-кB-GFP融合蛋白，應(yīng)用干擾載體進(jìn)行調(diào)節(jié)，經(jīng)倒置熒光顯微鏡及Westernblot檢測NF-кB-GFP

3、融合蛋白的表達(dá)，篩選有效的siRNA。 結(jié)果：模型組中大鼠的癥狀、體征、結(jié)腸組織大體標(biāo)本、病理切片均符合潰瘍性結(jié)腸炎模型建立的標(biāo)準(zhǔn)；與正常組相比，模型組中NF-кB mRNA表達(dá)水平升高；與模型組相比，西帕依潰結(jié)安干預(yù)組、生理鹽水陰性對照組、5-ASA陽性對照組NF-кB mRNA表達(dá)水平均降低，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；但西帕依潰結(jié)安干預(yù)組與生理鹽水陰性對照組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。倒置螢光顯微鏡及Weste