姜黃素對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎大鼠中Toll樣受體4-NF-κB通路的影響.pdf

1、目的：
　　通過(guò)研究姜黃素對(duì)Toll樣受體4（toll-like receptor，TLR4）、髓樣分化分子88（myeloid differentiation factor組，Myd88）、核因子-κB（Nuclear factor-κB， NF-κB）在潰瘍性結(jié)腸炎（ulcerative colitis，UC）大鼠模型結(jié)腸組織中的表達(dá)以及白細(xì)胞介素1（Interleukin-1，IL-1）、白細(xì)胞介素4（Interleukin

2、-4，IL-4）在 UC大鼠模型外周血中的表達(dá)水平的影響，初步探討姜黃素作用的可能機(jī)制，為其在臨床上應(yīng)用提供一定的理論依據(jù)。
　　材料和方法：
　　（1）分組：選用清潔級(jí)成年Sprague-Dawley（SD）大鼠100只，雌雄各半，隨機(jī)抽取70只，分為7組（每組10只），A組：模型組；造模成功后，分別予以不同劑量姜黃素和5-ASA行灌胃治療，B組：姜黃素50mg/（kg?d）組；C組：姜黃素100mg/（kg?d）組；D組

3、：姜黃素200mg/（kg?d）組；E組：5-ASA100mg/（kg?d）組；F組：姜黃素100mg/（kg?d）聯(lián)合5-ASA100mg/（kg?d）組，G組：正常對(duì)照組。
　?。?）造模：采用復(fù)合法（三硝基苯磺酸+乙醇）制備細(xì)胞免疫反應(yīng)性 UC大鼠模型，大鼠禁食不禁水24小時(shí)后麻醉，用硅膠管插入肛門內(nèi)8cm注入0.5ml的三硝基苯磺酸（Trinitrobenzene sulfonic acid，TNBS）（100mg/kg）

4、+乙醇溶液灌腸。
　?。?）處理：造模成功后，予以Cur和5-ASA連續(xù)灌胃14d。進(jìn)行大體形態(tài)損傷評(píng)分；HE染色觀察大鼠結(jié)腸黏膜組織學(xué)改變；采用RT-PCR法檢測(cè)UC各組大鼠結(jié)腸黏膜組織中TLR4、Myd88和NF-κB表達(dá)、Western blot法檢測(cè)UC各組大鼠結(jié)腸黏膜組織中TLR4、Myd88和NF-κB表達(dá)、ELISA法檢測(cè)各組外周血中IL-1、IL-4表達(dá)。
　　結(jié)果：
　?。?）大體形態(tài)及病理檢查結(jié)果：

5、模型組距肛門8厘米以內(nèi)可見腸黏膜充血、水腫、糜爛、壞死、腸壁增厚、潰瘍形成，HE染色后鏡下可見大量中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、漿細(xì)胞等炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，潰瘍邊緣腺體增生，腺體破壞，結(jié)構(gòu)紊亂，杯狀細(xì)胞減少，隱窩膿腫形成。組織學(xué)檢查證實(shí)均符合UC診斷標(biāo)準(zhǔn)。使用姜黃素和5-ASA干預(yù)后，姜黃素高、中、低劑量組，5-ASA組及聯(lián)合用藥組大體形態(tài)評(píng)分、組織學(xué)損傷評(píng)分有不同程度的降低。
　?。?）RT-PCR結(jié)果：模型組結(jié)腸黏膜組織中TLR4、Myd8

6、8、NF-κB明顯高于正常對(duì)照組（P<0.01），姜黃素高、中、低劑量組，5-ASA組及聯(lián)合用藥組TLR4、Myd88、NF-κB均有不同程度的降低，其中聯(lián)合用藥組表達(dá)最低。
　　（3）Western blot結(jié)果：與正常對(duì)照組比較，模型組結(jié)腸黏膜組織中TLR4、Myd88、NF-κB蛋白表達(dá)水平明顯升高，姜黃素高、中、低劑量組，5-ASA組及聯(lián)合用藥組 TLR4、Myd88、NF-κB蛋白表達(dá)水平均有不同程度的降低，以聯(lián)合用藥組

7、表達(dá)最低。
　?。?） ELISA結(jié)果：模型組血清中 IL-1可得出表達(dá)水平明顯高于正常對(duì)照組（P<0.01），IL-4表達(dá)水平明顯低于正常對(duì)照組（P<0.01），姜黃素高、中、低劑量組，5-ASA組及聯(lián)合用藥組IL-1表達(dá)水平均有不同程度的降低，以聯(lián)合用藥組降低最明顯，IL-4表達(dá)水平有不同程度的升高，以聯(lián)合用藥組升高最明顯。
　　結(jié)論：
　?。?）TLR4、Myd88和NF-κB在UC結(jié)腸黏膜中呈高表達(dá)，IL-1在