Toll樣受體4、Myd88通路在潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病機(jī)制中的作用研究.pdf

1、增高逐漸增強(qiáng)，Ⅲ級>Ⅱ級>Ⅰ級（P<0.05）；正常大鼠結(jié)腸上皮無Myd88mRNA的表達(dá)，不同程度UC結(jié)腸上皮均有Myd88mRNA表達(dá)，明顯高于正常對照組（P<0.01），隨組織學(xué)分級增高逐漸增強(qiáng)，Ⅲ級>Ⅱ級>Ⅰ級（P<0.05）。
　　結(jié)論：1、UC大鼠結(jié)腸黏膜中TLR4、Myd88和TNF-a表達(dá)較正常組明顯升高，且與UC的組織學(xué)分級呈正相關(guān)，提示其可能與UC發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。
　　2、TLR4與Myd88、TNF-a

2、在UC結(jié)腸黏膜中的表達(dá)呈顯著正相關(guān)，TLR4可能通過介導(dǎo) Myd88分子引發(fā)傳導(dǎo)通路下游基因的表達(dá)，最終導(dǎo)致炎癥因子TNF-a的釋放進(jìn)而引起腸道黏膜的炎癥爆發(fā)。
　　目的：本實(shí)驗(yàn)通過研究Toll樣受體4（toll-like receptor, TLR4）、髓樣分化分子88(myeloid differentiation factor, Myd88）及腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis facorα, TNF-α）在潰瘍

3、性結(jié)腸炎（ulcerative colitis, UC）大鼠模型結(jié)腸組織中的表達(dá)水平及相互關(guān)系，以探討TLR4/Myd88信號通路在UC發(fā)病中的作用，并為UC的病情發(fā)展及通路阻斷型藥物治療提供新的思路與參考。
　　材料和方法：選用清潔級成年Sprague-Dawley（SD）大鼠80只，雌雄各半，隨機(jī)抽取60只作為模型組。另外20只作為對照組。SD大鼠模型制造采用的是復(fù)合法：三硝基苯磺酸（TNBS）+乙醇，大鼠禁食24小時(shí)后麻醉，

4、用硅膠管插入肛門內(nèi)8cm注入0.5ml的TNBS（100mg/kg）+乙醇溶液灌腸。本模型有約1周的急性期，2周的慢性炎癥期。此方法造模與人類UC有較多相似之處，是較為理想的結(jié)腸炎模型。造模成功后，觀察和評估結(jié)腸黏膜的大體形態(tài)和組織學(xué)變化。應(yīng)用免疫組化及RT-PCR方法檢測TLR4、Myd88、TNF-a在SD大鼠模型組與正常對照組的結(jié)腸組織中的蛋白及基因表達(dá)水平，并將模型組的結(jié)腸組織按照 Dieleman提出的結(jié)腸炎癥的組織學(xué)分級標(biāo)準(zhǔn)

5、分為3個(gè)等級,檢測是否隨著等級升高，TLR4、Myd88、TNF-a的表達(dá)水平也隨之上調(diào)。
　　結(jié)果：1、大體形態(tài)及病理檢查結(jié)果：模型組60只（其中有58只大鼠）距肛門8厘米以內(nèi)可見腸黏膜充血、水腫、糜爛、壞死、腸壁增厚、潰瘍形成，HE染色后鏡下可見大量單核細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、漿細(xì)胞等炎癥細(xì)胞浸潤，潰瘍形成。組織學(xué)檢查證實(shí)均符合UC診斷標(biāo)準(zhǔn)，造模成功率為97％。
　　2、免疫組化結(jié)果：TLR4、Myd88和TNF-a蛋白在UC

6、大鼠結(jié)腸上皮和炎癥細(xì)胞中的表達(dá)均高于正常對照組（P<0.01），陽性率與組織學(xué)分級呈正相關(guān)（P<0.05）。UC大鼠結(jié)腸上皮和炎癥細(xì)胞中TLR4和Myd88的表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.933， P<0.01），TLR4和TNF-a的表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.793，P<0.01）。
　　3、RT-PCR結(jié)果：正常大鼠結(jié)腸上皮無TLR4mRNA的表達(dá)，不同程度UC結(jié)腸上皮均有TLR4mRNA表達(dá)，明顯高于正常對照組（P<0.01），隨組織學(xué)

7、分級增高逐漸增強(qiáng)，Ⅲ級>Ⅱ級>Ⅰ級（P<0.05）；正常大鼠結(jié)腸上皮無Myd88mRNA的表達(dá)，不同程度UC結(jié)腸上皮均有Myd88mRNA表達(dá)，明顯高于正常對照組（P<0.01），隨組織學(xué)分級增高逐漸增強(qiáng)，Ⅲ級>Ⅱ級>Ⅰ級（P<0.05）。
　　結(jié)論：1、UC大鼠結(jié)腸黏膜中TLR4、Myd88和TNF-a表達(dá)較正常組明顯升高，且與UC的組織學(xué)分級呈正相關(guān)，提示其可能與UC發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。
　　2、TLR4與Myd88、TNF