蛋白C途徑在潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病中的作用.pdf

1、潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis, UC)是炎癥性腸病(inflammatory bowel disease, IBD)的一個(gè)主要類型，是一種主要累及大腸的局部性和全身性慢性炎癥。該患者的血栓栓塞并發(fā)癥風(fēng)險(xiǎn)增加，影響其生存率和死亡率。1936年Bargen和Barkesher首先報(bào)道了潰瘍性結(jié)腸炎患者合并動(dòng)靜脈血栓栓塞并發(fā)癥。在梅奧診所的大量調(diào)查中Talbot等人發(fā)現(xiàn)約1.3％的IBD病人合并血栓栓塞并發(fā)癥，而其他研究

2、報(bào)道的發(fā)生率更高，達(dá)到7%。一項(xiàng)來(lái)自于尸檢的結(jié)果發(fā)現(xiàn)UC患者的靜脈血栓栓塞并發(fā)癥能高達(dá)39%，說(shuō)明大部分的栓塞發(fā)生并沒(méi)有臨床表現(xiàn)或被臨床忽視了。血栓栓塞并發(fā)癥是這些患者的第三大死亡原因（10%）。這種高凝狀態(tài)是伴隨炎癥活動(dòng)而出現(xiàn)，炎癥控制而緩解，血栓可使腸道黏膜缺血壞死，嚴(yán)重致潰瘍形成，進(jìn)而加重 UC患者結(jié)腸、直腸黏膜病變。因此，血栓栓塞并發(fā)癥已成為UC病情惡化的主要原因，嚴(yán)重影響UC患者的生存質(zhì)量，危及其生命。
　　UC是一種復(fù)

3、雜的疾病，涉及疾病發(fā)生和進(jìn)展階段黏膜免疫和胃腸道生理學(xué)改變。近期研究表明：UC導(dǎo)致的病理異常不僅僅局限于抗原呈遞細(xì)胞（例如樹(shù)突細(xì)胞）的功能障礙或CD4+T細(xì)胞（類似牛皮癬中的T細(xì)胞紊亂）的過(guò)度活化，涉及一些非免疫細(xì)胞，如微血管內(nèi)皮細(xì)胞，調(diào)節(jié)炎癥細(xì)胞的募集，組織損傷（例如血管性水腫）和炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生。UC患者病情發(fā)展中存在著炎癥-凝血兩大系統(tǒng)間的互動(dòng)，主要表現(xiàn)為微血栓形成及微循環(huán)障礙。血管內(nèi)皮已經(jīng)被證明是其相互作用的界面，而蛋白 C(pr

4、otein C, PC)途徑是血管內(nèi)皮功能重要的介導(dǎo)者。PC途徑是天然抗凝血系統(tǒng)，包括兩種維生素K依賴性血漿蛋白，酶原PC和輔因子蛋白S(protein S, PS)，以及膜受體，血栓調(diào)節(jié)蛋白（thrombomodulin, TM）和內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體（endothelial cell protein C receptor, EPCR）。其抗凝途徑主要通過(guò)滅活凝血因子Ⅴ和Ⅷ，限制凝血因子Ⅹa與血小板結(jié)合以及增強(qiáng)纖維蛋白的溶解來(lái)進(jìn)行，直接

5、影響凝血-抗凝機(jī)制的動(dòng)態(tài)平衡。UC中血栓栓塞風(fēng)險(xiǎn)增加可能主要是凝血系統(tǒng)中炎癥途徑（如細(xì)胞和細(xì)胞因子）的活化產(chǎn)生的生物學(xué)和生物化學(xué)效應(yīng)。腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor-α,TNF-α）主要由巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞和NK細(xì)胞產(chǎn)生，與局部炎癥相關(guān)，已證實(shí)其在炎癥誘導(dǎo)凝血激活過(guò)程中具有重要核心地位。將 TNF-α注入人體后檢測(cè)多種凝血指標(biāo)，結(jié)果顯示凝血途徑被激活。白介素-6（interleukin-6, IL-6）也可誘導(dǎo)凝

6、血系統(tǒng)激活，應(yīng)用抗IL-6可阻止系統(tǒng)感染導(dǎo)致的凝血異常。已經(jīng)證明 TNF-α和 IL-6在白細(xì)胞的細(xì)胞表面上誘導(dǎo)組織因子(tissue factor, TF)產(chǎn)生，推測(cè)細(xì)胞因子是通過(guò)TF的表達(dá)來(lái)促進(jìn)高凝狀態(tài)的形成。有研究表明TNF-α、IL-6等炎性細(xì)胞因子可能通過(guò)刺激結(jié)腸微血管內(nèi)皮細(xì)胞改變PC途徑。
　　目的：本文旨在研究UC患者血液高凝狀態(tài)的形成機(jī)制。UC發(fā)病過(guò)程中炎癥因子的激活是否會(huì)導(dǎo)致 PC途徑的抑制及作用的失活，PC途徑

7、的抑制水平是否與UC的嚴(yán)重程度具有相關(guān)性。
　　方法：
　　1.收集確診為 UC活動(dòng)期患者30例作為實(shí)驗(yàn)組，并按照改良 Mayo評(píng)分將其分為輕度、中度、重度三組，輕度組10例，中度組8例，重度組12例。結(jié)腸息肉患者11例作為對(duì)照組。
　　2.用ELISA法測(cè)定血漿TNF-α、IL-6水平，發(fā)色底物法測(cè)定血漿PC、PS活性，經(jīng)結(jié)腸鏡下取直-乙交界處結(jié)腸黏膜2塊，采用HE染色顯微鏡下觀察結(jié)腸黏膜組織病理學(xué)表現(xiàn)，免疫組織化學(xué)

8、法測(cè)定結(jié)腸 TM、EPCR表達(dá)。應(yīng)用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，P＜0.05差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1.血漿TNF-α、IL-6水平
　　ELISA結(jié)果顯示：與對(duì)照組比較，UC組患者血漿TNF-α、IL-6水平明顯升高，TNF-α水平統(tǒng)計(jì)學(xué)分析為重度組（373.695±23.651）pg/mL＞中度組（228.147±13.340）pg/mL＞輕度組（112.209±10.182）pg/

9、mL＞對(duì)照組（33.179±9.811）pg/mL，任意兩組比較 P＜0.05，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；IL-6水平統(tǒng)計(jì)學(xué)分析為重度組（325.801±17.011）pg/mL＞中度組（214.022±20.274）pg/mL＞輕度組（111.698±12.498）pg/mL＞對(duì)照組（35.499±8.275）pg/mL，任意兩組比較P＜0.05，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；
　　2.血漿PC、PS活性
　　發(fā)色底物法結(jié)果顯示：與對(duì)照組比較

10、，UC組患者血漿PC、PS活性水平明顯降低，PC活性統(tǒng)計(jì)學(xué)分析對(duì)照組（110.55±15.845）%＞輕度組（66.20±7.510）%＞中度組（52.25±6.628）%＞重度組（36.42±4.772）%，任意兩組比較 P＜0.05，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；PS活性統(tǒng)計(jì)學(xué)分析對(duì)照組（111.82±15.760）%＞輕度組（65.70±9.117）%＞中度組（50.75±5.701）%＞重度組（34.58±5.368）%，任意兩組比較P＜0

11、.05，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；
　　3.血漿PC活性與炎癥程度相關(guān)性分析
　　將血漿TNF-α水平作為自變量，將血漿PC活性作為應(yīng)變量，進(jìn)行直線相關(guān)分析，結(jié)果顯示，UC血漿PC活性與血漿TNF-α水平呈負(fù)相關(guān)(r=-0.934，P＜0.05)；
　　4.HE染色結(jié)果
　　細(xì)胞核為紫藍(lán)色，細(xì)胞漿、膠原纖維及基底膜為粉紅色。對(duì)照組結(jié)腸黏膜上皮結(jié)構(gòu)完整連續(xù)，腺體細(xì)胞排列整齊，杯狀細(xì)胞數(shù)量較多，固有層可見(jiàn)少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；U

12、C各組出現(xiàn)不同程度的組織黏膜損傷，黏膜下充血、水腫，隱窩結(jié)構(gòu)紊亂、破壞，隱窩內(nèi)及隱窩上皮可見(jiàn)大量中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，杯狀細(xì)胞減少，潘氏細(xì)胞化生，固有層內(nèi)有大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，包括中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞等。嚴(yán)重者可出現(xiàn)粘膜上皮脫落；
　　5.結(jié)腸組織TM、EPCR表達(dá)
　　免疫組化結(jié)果顯示：對(duì)照組結(jié)腸黏膜組織中TM及EPCR呈深棕色表達(dá)，主要位于黏膜及黏膜下層微血管內(nèi)皮細(xì)胞，而UC組呈棕黃色或淺黃色表達(dá)

13、，且表達(dá)量較對(duì)照組明顯減少。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析TM表達(dá)的平均光密度值（optical density, OD）為重度組（0.0834±0.0178）＞中度組（0.1466±0.0067）＞輕度組（0.2121±0.0160）＞對(duì)照組（0.3246±0.0145），任意兩組比較 P＜0.05，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 EPCR表達(dá)的OD值為重度組（0.0888±0.0111）＞中度組（0.1438±0.0069）＞輕度組（0.1838±0.0