BAHD1在潰瘍性結腸炎中的作用及機制探討.pdf

1、研究背景及目的:
　　潰瘍性結腸炎(ulcerative colitis，UC)是累及結腸粘膜慢性非特異炎癥性疾病，病程漫長且反復發(fā)作，甚至癌變。近年來我國UC發(fā)病率呈明顯增加趨勢，構成日益嚴重的社會健康問題。UC發(fā)病機制尚未完全明確，目前主要認為與遺傳、環(huán)境、免疫等因素有關;深入揭示UC發(fā)生發(fā)展的分子機制，并發(fā)掘潛在的干預治療靶點，對提高UC防治水平有重要意義。
　　BAHD1（Bromo Adjacent Homolog

2、y Domain-containing protein1）是通過轉錄譜印記關聯分析方法篩選出的可能與UC的發(fā)病可能密切相關的106種蛋白分子之一，其參與異染色質形成并維持細胞正常分化及胞內穩(wěn)態(tài)。研究發(fā)現腸道上皮細胞BAHD1在宿主抗病原微生物感染過程中發(fā)揮調節(jié)作用，包括BAHD1在內的新型基因沉默復合物對干擾素誘導的下游基因(interferon stimulated genes，ISGs)表達調控具有普適性。
　　作一種為新近發(fā)

3、現的核蛋白，BAHD1是否參與調控UC的發(fā)生發(fā)展尚未見文獻報告。本研究旨在通過體內驗證結合體外探索分子機制的方法，探討B(tài)AHD1在UC發(fā)生發(fā)展中的可能調控作用及其中所涉及的分子機制。
　　方法:
　　(1)急性UC動物模型建立:用含硫酸鹽葡聚糖鈉（dextran sodium sulfate，DSS)高壓滅菌水喂養(yǎng)8-10周齡C57BL/6系小鼠，構建小鼠急性UC模型，通過小鼠結腸炎疾病活動指數、結腸炎病理評分標準評價動物模

4、型建模情況。
　　(2)構建細胞模型模擬結腸細胞炎癥環(huán)境:炎癥介質TNF-α、IFN-γ、IL-1β及LPS混合物刺激Caco-2細胞，模擬結腸上皮細胞炎癥環(huán)境，用以研究結腸上皮細胞胞內炎癥信號變化。
　　(3)收集UC病人及對照健康（為手術病人癌旁或癌遠端）結腸組織切片，通過免疫組化法檢測BAHD1在結腸上皮細胞中的定位以及UC中的表達變化。
　　(4) siBAHD1轉染Caco-2細胞:應用脂質體Lipofect

5、amine3000將siRNA轉入Caco-2細胞，設立陰性對照組，于轉染48h后構建細胞模型。
　　(5) ELISA檢測:留取培養(yǎng)基上清及小鼠UC模型及對照組遠端結腸，檢測各組相關炎癥因子表達變化。
　　(6)qRT-PCR檢測:轉錄譜印記分析法預測分子在UC動物模型中的表達驗證;BAHD1表達下降后細胞因子包括促炎癥因子、趨化因子以及粘附因子在mRNA水平的表達變化。
　　(7) Western blot檢測:B

6、AHD1表達下調對包括IKK/NF-κB及MAPK(JNK/AP-1，p-P38及p-ERK)經典炎癥通路中關鍵蛋白及Caspase-8激活的影響，對上游TNFR1的表達影響。
　　結果:
　　(1)動物模型建立:成功建立DSS誘導小鼠急性結腸炎模型，DSS組小鼠結腸炎疾病活動指數及結腸炎病理評分明顯高于對照組;
　　(2)細胞模型模擬結腸細胞炎癥環(huán)境:炎癥介質（TNF-α、IFN-γ、IL-1β及LPS）混合物刺激C

7、aco-2細胞產生明顯的胞內炎癥反應;
　　(3) BAHD1在小鼠與人的結腸上皮細胞中普遍表達，且與健康結腸組織比較，UC病人及DSS造模小鼠的結腸中BAHD1表達下降;
　　(4)敲低結腸上皮細胞BAHD1對細胞因子表達的影響:與模型對照組相比，siBAHD1組相關的細胞因子表達水平上升明顯。
　　(5)在炎癥介質刺激下，經典炎癥通路IKK/NF-κB、JNK/AP-1及Caspase-8在siBAHD1組激活更加

8、明顯;TNFR1表達水平在siBAHD1組上升明顯。
　　(6) BAHD1通過調控TNFR1表達介導TNF信號通路。
　　結論:
　　轉錄譜印記分析預測分子BAHD1可能參與維持腸道細胞內環(huán)境穩(wěn)態(tài)，其表達異?？赡茉赨C的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用:
　　(1) BAHD1在體內外模型及UC病人中表達下調;
　　(2) BAHD1下調介導腸道細胞過度、持續(xù)性的免疫反應;
　　(3) BAHD1可能通過