毛細(xì)管電泳與MALDI-TOF-MS法聯(lián)用測定血清轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白的化學(xué)修飾.pdf

1、自從Andrade于1952年首先報道家族性淀粉樣多發(fā)神經(jīng)病以來，世界各地均相繼報道該病，尤以歐州和日本多見。該病已從臨床、病理、分子生物學(xué)等方面進(jìn)行了詳盡的研究，主要累及周圍神經(jīng)系統(tǒng)，并伴有心臟、腎臟、消化道和眼睛的癥狀。老年性淀粉樣變主要累及心臟等實(shí)質(zhì)器官，導(dǎo)致心衰、傳導(dǎo)阻滯、心率失常。80歲以上人群老年性淀粉樣變發(fā)病率約為25％。
　　人轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白(TTR)與家族性淀粉樣多發(fā)神經(jīng)病和老年性淀粉樣變相關(guān)，TTR主要是由肝臟

2、和脈絡(luò)叢細(xì)胞產(chǎn)生，參與轉(zhuǎn)運(yùn)甲狀腺素和視黃醇蛋白。當(dāng)TTR立體結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，可以聚合形成纖維狀結(jié)構(gòu)沉積于細(xì)胞間質(zhì)，可以導(dǎo)致家族性淀粉樣多發(fā)神經(jīng)病和老年性淀粉樣變。老年性淀粉樣變病變部位沉積的淀粉樣變纖維主要是未突變的TTR，家族性淀粉樣多發(fā)神經(jīng)病是基因點(diǎn)突變的TTR。關(guān)于老年性淀粉樣變的形成機(jī)制仍不完全明確，但是體外試驗(yàn)表明人轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白立體結(jié)構(gòu)改變是淀粉樣變纖維形成的重要步驟。
　　本研究的目的是建立一種毛細(xì)管電泳與基質(zhì)輔助激光

3、解吸/電離飛行時間質(zhì)譜聯(lián)用測定血清TTR化學(xué)修飾的方法。首先采用酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒測定20例老年性淀粉樣變患者及20例健康體檢者血清TTR含量，健康對照組血清 TTR含量為0.25±0.04g/L，老年性淀粉樣變組血清 TTR含量為0.26±0.03g/L，兩組間 TTR差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　應(yīng)用毛細(xì)管電泳法分離血清轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白，利用基質(zhì)輔助激光解吸/電離飛行時間質(zhì)譜測定血清TTR的化學(xué)修飾。分析結(jié)果顯示健

4、康對照組和老年性淀粉樣變組血清 TTR均發(fā)現(xiàn)4種主要類型的TTR修飾峰，兩組間TTR的修飾峰存在差異，與標(biāo)準(zhǔn)對照計算相對分子質(zhì)量[質(zhì)/荷比(m/z)]分別為：13750.86±1.48、13830.63±2.76、13871.70±2.70、13919±14.77，經(jīng)過與氨基酸相對分子質(zhì)量比較分別對應(yīng)：未修飾轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白、磺化轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白、半胱氨酸轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白和半胱氨酸甘氨酸轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白。
　　由于蛋白組學(xué)技術(shù)分析發(fā)現(xiàn)TT

5、R化學(xué)修飾能夠影響立體結(jié)構(gòu)，促進(jìn)淀粉樣變纖維的形成。一些未知因素觸發(fā)淀粉樣變纖維的形成，體內(nèi)微環(huán)境例如蛋白質(zhì)的含量、離子強(qiáng)度、pH值、特殊的酶和其它細(xì)胞成分可能是關(guān)鍵。提示機(jī)體代謝對于 TTR蛋白的影響可能與淀粉樣變纖維形成密切相關(guān)。在老年性淀粉樣變患者老齡或氧化應(yīng)激造成的TTR化學(xué)修飾可能是淀粉樣變沉積組織的一個潛在危險因素。
　　本研究使用了酶聯(lián)免疫吸附法、毛細(xì)管電泳法和基質(zhì)輔助激光解吸/電離飛行時間質(zhì)譜三種方法，建立測定血清