川銀花主流品種(細氈毛忍冬)特征性成分的分離及含量測定研究.pdf

1、細氈毛忍冬Lonicera similes Hemsl為現(xiàn)行版《四川省中藥材標準》（2008年版）川銀花項下的基源植物之一，且為川產(chǎn)金銀花的主流品種。為配合四川省教育廳重點項目“川銀花主流品種（細氈毛忍冬）特征性成分的分離及含量測定研究”，本文在前期研究的基礎上，針對細氈毛忍冬的有效部位黃酮類和皂苷類成分進行分離、純化，并選擇具有專屬性的指標成分，建立其定性、定量分析方法，為完善和提高現(xiàn)有的川銀花質(zhì)量評價標準提供技術支撐，同時推動川產(chǎn)藥

2、材“地方標準”上升為“國家標準”，進而擴大川產(chǎn)藥材優(yōu)勢資源的使用范圍，促使我省貧困地區(qū)南江縣的自然資源優(yōu)勢向經(jīng)濟優(yōu)勢的轉(zhuǎn)化，促進地方經(jīng)濟的發(fā)展。研究結(jié)果如下:
　　1脫離傳統(tǒng)的“系統(tǒng)溶劑法提取分離-藥效學篩選-有效部位分離純化”的模式，直接以已知的金銀花類藥材除有機酸類的另外兩類有效部位黃酮類和皂苷類成分為切入點，進行提取分離，尋找專屬性成分。
　　1.1首次進行了大孔樹脂純化細氈毛忍冬總黃酮的工藝研究。
　　本文針對

3、細氈毛忍冬總黃酮純化工藝，以靜態(tài)吸附率及解析率為指標，考察了5種不同極性的大孔吸附樹脂，優(yōu)選出了適宜的大孔樹脂型號，并考察了影響其動態(tài)吸附和解析的相關因素，最終確定大孔樹脂純化細氈毛忍冬總黃酮的最佳工藝為:D101大孔樹脂純化細氈毛忍冬提取物，上柱藥液生藥濃度為0.10 g/ml，比上柱量2.74g/g(藥材/干樹脂)上柱吸附。
　　1.2采用大孔樹脂、硅膠柱層析、凝膠色譜等方法對細氈毛忍冬各大孔樹脂流分進行分離純化;從中分離得到

4、11個化合物，采用1HNMR、13C NMR等多種現(xiàn)代波譜解析技術，并結(jié)合化學反應、對照品比較、文獻對比等手段鑒定其結(jié)構，最終確定了9個化合物的化學結(jié)構，分別為:5-羥基-7，4'-二甲氧基黃酮(Ⅰ)，蘆丁(Ⅲ)，槲皮素(Ⅳ)，穗花杉雙黃酮(Ⅴ)，秦皮乙素(Ⅶ)，B-谷甾醇(Ⅷ)，5-羥基-7，3'，4'-三甲氧基黃酮(Ⅸ)，齊墩果酸(Ⅹ)，B-胡蘿卜苷(Ⅺ)。其中化合物Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅸ這5個化合物均為黃酮類化合物，化合物Ⅰ、Ⅴ、Ⅶ、

5、Ⅸ、Ⅹ、Ⅺ這6個化合物均為首次從細氈毛忍冬中分離得到。
　　2首次進行了細氈毛忍冬中5-羥基-7，3'，4'-三甲氧基黃酮的薄層色譜鑒別研究，建立了其微乳薄層色譜鑒別方法。
　　通過對提取方法、水解時間、展開系統(tǒng)、點樣量、展距、展開溫度、薄層板飽和時間等的考察，最終建立了細氈毛忍冬中5-羥基-7，3'，4'-三甲氧基黃酮的微乳薄層鑒別方法，以含水量75％的微乳液-甲酸(9∶1)為展開劑，分離效果好，展開后Rf值適中，色譜斑點

6、清晰。通過對10批不同產(chǎn)地的細氈毛忍冬對口藥材及商品藥材的薄層色譜試驗，表明該方法對細氈毛忍冬中5-羥基-7，3'，4'-三甲氧基黃酮的鑒別有較好的適應性，重現(xiàn)性較好。
　　同時采用該方法進行了細氈毛忍冬與現(xiàn)行版《中國藥典》收載的金銀花（忍冬）、山銀花（灰氈毛忍冬、黃褐毛忍冬、華南忍冬）的對比鑒別，結(jié)果表明，除忍冬外其它幾種銀花均未檢出5-羥基-7，3'，4'-三甲氧基黃酮，表明該成分用于細氈毛忍冬的薄層色譜鑒別具有一定的專屬性，

7、雖然忍冬中也可檢出該成分，但二者的其它色譜斑點有差異，可予以區(qū)別。
　　3首次進行了細氈毛忍冬中5-羥基-7，3'，4'-三甲氧基黃酮的含量測定研究，建立了其HPLC含量測定方法。
　　通過對最大吸收波長、色譜條件的篩選，供試品溶液制備方法的考察以及精密度、穩(wěn)定性、重復性、加樣回收試驗等方法學考察，建立了細氈毛忍冬中5-羥基-7，3'，4'-三甲氧基黃酮的HPLC含量測定方法，該方法簡便、快速，可操作性強。通過對10批不同產(chǎn)

8、地的細氈毛忍冬對口藥材及商品藥材中5-羥基-7，3'，4'-三甲氧基黃酮的含量測定，結(jié)果表明，最高可達1.08％，最低為0.36％，平均為0.68％。
　　同時測定了現(xiàn)行版《中國藥典》收載的金銀花（忍冬）、山銀花（灰氈毛忍冬、黃褐毛忍冬、華南忍冬）中該成分的含量，結(jié)果表明，忍冬中雖含5-羥基-7，3'，4'-三甲氧基黃酮，但含量明顯低于細氈毛忍冬，為0.14％、0.11％，而其它幾種銀花中均未檢測出此成分。表明5-羥基-7，3'，