電針對潰瘍性結(jié)腸炎大鼠腸道微生態(tài)的保護作用研究.pdf

1、目的:
　　研究電針對潰瘍性結(jié)腸炎(Ulcerative Colitis，UC)模型大鼠腸道菌群多樣性和豐度的影響，明確電針對腸道微生態(tài)的保護作用和影響的關(guān)鍵菌群，從“腸道微生態(tài)”這一全新角度研究針灸對UC的治療作用，為深入探討針灸治療腸道疾病的作用機理提供基礎(chǔ)，并進一步對針灸學(xué)理論與現(xiàn)代生物技術(shù)的有機結(jié)合提供新的研究方向。
　　方法:
　　39只健康雄性SD大鼠隨機分為空白組和UC模型組，模型組飲用4％的葡聚糖硫酸鈉

2、(Dextran Sulfate Sodium，DSS)溶液復(fù)制潰瘍性結(jié)腸炎模型，造模成功后再按體重隨機分為模型組和電針組。電針組選取“天樞”“足三里”“上巨虛”進行治療，5天為一療程，空白組和模型組不作治療。采用疾病活動指數(shù)（Disease Activity Index，DAI）比較各組大鼠的一般活動狀況;采用聯(lián)苯胺法評價各組糞便隱血情況;采用組織病理染色切片和透射電鏡等方法研究回盲部和遠端結(jié)腸組織病理形態(tài)學(xué)的變化。收集各組大鼠糞便排

3、泄物，采用變性梯度凝膠電泳（Denaturing Dradient Gel Electrophoresis，DGGE）等分子生態(tài)學(xué)方法研究腸道菌群的多樣性、相似性及豐度;對優(yōu)勢條帶進行主成分分析(PrincipalComponent Analysis，PCA)模式識別分析;特異條帶回收測序，鑒定菌種;所得結(jié)果及數(shù)據(jù)采用Quantity one、Chromas、MGAE5、SIMCA-P+及SPSS18.0等軟件進行分析。
　　結(jié)果

4、:
　　1.電針對UC模型大鼠的治療效應(yīng)觀察結(jié)果:
　　1) DSS誘導(dǎo)潰瘍性結(jié)腸炎后，模型大鼠一般狀況差，大便出現(xiàn)膿血，DAI評分顯著增高;電針治療組大鼠精神狀況明顯好轉(zhuǎn)，大便性狀、膿血便等情況得到明顯改善，DAI評分下降，組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　2)光鏡觀察結(jié)果顯示，與空白組相比，UC模型組回盲部及遠端結(jié)腸組織粘膜層結(jié)構(gòu)破壞，潰瘍形成，粘膜下層充血水腫，大量炎細胞浸潤，杯狀細胞減少，大量的游

5、離的壞死組織;電針治療組腸粘膜結(jié)構(gòu)完整，腺體排列較整齊，粘膜下層無明顯充血水腫，只有少量炎細胞浸潤，可見杯狀細胞增生。
　　3)電鏡觀察結(jié)果顯示，與空白組相比，模型組回盲部及遠端結(jié)腸組織微絨毛稀疏，變短，上皮細胞間有大量空泡，線粒體腫脹，炎細胞廣泛浸潤。電針治療組微絨毛相對整齊，線粒體正常，細胞核染色質(zhì)分布均勻，胞漿均勻，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)豐富。
　　2.電針對UC大鼠腸道菌群的保護作用研究結(jié)果:
　　1) DGGE凝膠電泳顯

6、示，與空白組相比，UC模型組腸道菌群的豐度及多樣性指數(shù)明顯降低(P＜0.05)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義;電針組腸道菌群的豐度及多樣性指數(shù)較模型組有明顯增高(P＜0.05)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　2)克隆測序結(jié)果:樣本菌種鑒定主要歸屬于擬桿菌門（Bacteroidetes）、厚壁菌門（Firmicutes）及變形菌門（Proteobacteria）這三大類，其中擬桿菌門可培養(yǎng)出的細菌種類主要有Bacteroides coprocola，

7、還有一些未培養(yǎng)擬桿菌;厚壁菌門可培養(yǎng)出的細菌種類主要有Lactobacillus sp.、Lactobacillus johnsonii、Clostridium bifermentans;變形菌門可培養(yǎng)的細菌種類有Anaerobiospirillumsucciniciproducens,Lawsonia intracellularis，其中Lactobacillus sp.與Lactobacillusjohnsonii針刺后其含量增加，

8、與模型組比較差異有統(tǒng)計意義;Clostridiumbifermentans其含量在模型組顯著升高，高于正常組，針刺之后其含量顯著下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.電針對DSS誘導(dǎo)的UC模型大鼠一般情況和腸道遠端及回盲部粘膜組織病理改變有明顯的改善作用。
　　2.UC模型大鼠腸道內(nèi)細菌豐度及多樣性明顯低于正常對照組，電針能提高UC大鼠腸道細菌的豐度及多樣性，表明電針對腸道細菌多樣性有良性保護作