shRNA表達框的快速制備及其在抗HBV相關(guān)研究中的應(yīng)用.pdf

1、慢性HBV感染的抗病毒治療一直是醫(yī)學界的重大難題,現(xiàn)有干擾素和拉米夫定的臨床療效有限,不斷嘗試進行的其它治療方法,至今又尚無令人滿意的結(jié)果,RNA干擾技術(shù)的出現(xiàn),為處于困鏡的研究又帶來一線新的希望.在該研究第一部分著重探索建立簡單高效的重疊延伸一步PCR方法,以能夠保質(zhì)保量地構(gòu)建和擴增SEC,并以增強型綠色熒光蛋白(enhanced green fluorescence protein,EGFP)作為靶基因,證實PCR制備的SEC 用于

2、瞬時RNAi效應(yīng)研究及有效siRNA篩選的可行性.在該研究第一部分著重探索建立簡單高效的重疊延伸一步PCR方法,以能夠保質(zhì)保量地構(gòu)建和擴增SEC,并以增強型綠色熒光蛋白(enhanced green fluorescence protein,EGFP)作為靶基因,證實PCR制備的SEC 用于瞬時RNAi效應(yīng)研究及有效siRNA篩選的可行性.大規(guī)模siRNA篩選工作還取決于簡便易行、快速準確的效應(yīng)報告系統(tǒng).目前應(yīng)用最為廣泛的是熒光蛋白,它

3、通過易于檢測的熒光表達來反映與之融合的目標基因表達情況.以此建立的致病基因表達報告系統(tǒng),使包括siRNA在內(nèi)各種基因治療方法的效果評估變得方便而高效.在該研究第二部分,我們即以增強型綠色熒光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)作為報告分子建立HBx瞬時表達的快速報告系統(tǒng),并運用第一部分介紹的重疊延伸一步PCR法制備針對細胞外源致病基因HBx的shRNA表達框,初步建立了HBx-siRNA