腎舒康治療大鼠主動型Heymann腎炎的實驗研究.pdf

1、目的： 膜性腎病(membranousne nephropathy MN)是以腎小球基底膜上皮細胞下免疫復(fù)合物沉積為特點的一種腎小球疾病，常表現(xiàn)為腎病綜合征。臨床以大量蛋白尿、低蛋白血癥、高度水腫和高脂血癥為主要表現(xiàn)。本病的發(fā)病率較高，國內(nèi)10594例腎活檢病理資料分析顯示，原發(fā)性腎小球疾病中膜性腎病占第3位(9.54％)，且近10年來明顯增多<'[1]>。其病變呈慢性進行性發(fā)展，多發(fā)展為腎小球硬化和腎間質(zhì)纖維化，約25％的患者

2、最終出現(xiàn)腎功能衰竭<'[2]>，嚴(yán)重影響患者身心健康和生活質(zhì)量。目前西醫(yī)治療主要是通過糖皮質(zhì)激素或免疫抑制劑調(diào)節(jié)體液和細胞免疫功能，但單用糖皮質(zhì)激素或免疫抑制劑難以全面的控制疾病，且有較大的副反應(yīng)<'[3]>。中醫(yī)藥治療本病療效較好，毒副作用小，所以被廣泛的應(yīng)用于臨床。 導(dǎo)師陳志強教授根據(jù)膜性腎病的病因病機特點，提出了健脾補腎固其本，活血化瘀通絡(luò)、清熱利濕泄?jié)嶂纹錁?biāo)，多法并舉的治療思路，并在此法指導(dǎo)下結(jié)合現(xiàn)代藥理研究，創(chuàng)立了治療

3、膜性腎病的有效中藥復(fù)方-腎舒康(ShenshukangSSK)。 本課題通過復(fù)制與人類膜性腎病極其相似的大鼠主動型Heymann腎炎(Active Heymann Nephropathy AHN)模型，并用腎舒康對其進行干預(yù)性治療，同時用免疫抑制劑雷公藤多甙(Tripterygium wilfordii Glycoside TWP)為對照，旨在通過觀察AHN模型大鼠的尿蛋白、血生化指標(biāo)與腎臟病理形態(tài)學(xué)改變，明確腎舒康在AHN疾病

4、過程中的干預(yù)作用，為該方臨床應(yīng)用提供科學(xué)的實驗依據(jù)。 方法： (1)制備腎皮質(zhì)勻漿：選取健康雄性SD大鼠(清潔級)，戊巴比妥鈉麻醉，在無菌條件下剖開腹腔，結(jié)扎腎動脈，自結(jié)扎處向腎臟插管，剪斷腎靜脈，經(jīng)插管用生理鹽水反復(fù)沖洗腎臟后，取下腎臟；剪取腎皮質(zhì)，充分研磨后加入適量生理鹽水，通過銅絲篩網(wǎng)過濾，收集濾液，離心取上清，然后經(jīng)超速離心后，雙蒸水洗滌3次，收集沉淀；每次用時，取20g皮質(zhì)，加完全弗氏佐劑40ml。 (2)造模

5、：選用同種清潔級SD大鼠40只，普通飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，檢測尿蛋白和尿紅細胞均為陰性。按體重隨機分為2組，正常組(Normal groupes,10只)和造模組(Model Made groupes,30只)。造模組大鼠腹腔注射上述大鼠腎皮質(zhì)十弗氏佐劑乳液，每次2ml/只，每兩周注射1次，共注射4次。造模8周后，造模組隨機抽取3只，正常組隨機抽取1只大鼠，麻醉后摘取腎臟，分別取樣行光鏡及電鏡檢查，結(jié)果提示造模組AHN模型成功。在此基礎(chǔ)上

6、，根據(jù)24h尿蛋白將造模組大鼠隨機分為3組：模型組(Model groupe)、雷公藤多甙組(Tripterygitimwilfordii Glycoside group TWG)和腎舒康組(Shenshukanggroupe SSK)，每組9只。 (3)藥物干預(yù)：實驗第9周開始給藥，連續(xù)4周。雷公藤多甙組按9.45mg/Kg/d灌胃給藥，腎舒康組按人與大鼠體表面積換算的等效劑量19.38g/kg/d灌胃給藥，正常組和模型組灌服

7、等量蒸餾水，均每日一次，治療連續(xù)4周。各組動物自由進食、飲水。 (4)觀察指標(biāo)：于實驗第4，8，10，12周放入大鼠代謝籠中(每籠1只)收集24h尿液，測定各組大鼠24h尿蛋白的含量。第12周末殺檢動物，股靜脈取血，用全自動生化分析儀檢測各組大鼠血總蛋白(TP)、白蛋白(Alb)、血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、全血黏度(ηb，高切、低切)、血漿黏度(ηp)、纖維蛋白原(Fig)、紅細胞壓積比(HCT)、尿素氮(BUN)

8、、血肌酐(Scr)。腎組織行光鏡、電鏡、免疫熒光檢查。 結(jié)果： (1)24h尿蛋白定量免疫第4周末開始除正常組外造模組大鼠均出現(xiàn)明顯尿蛋白，與正常組比有明顯差異(P<0.05)；免疫第8周末造模組尿蛋白明顯升高，與正常組相比有非常顯著性差異(P<0.01)；腎舒康組與雷公藤多甙組第10周末24h尿蛋白定量與模型組相比明顯下降(P<0.05)；第12周末兩治療組尿蛋白與模型組相比，出現(xiàn)非常顯著性差異(P<0.01)，腎舒康

9、組與雷公藤多甙組第10、12周末24h尿蛋白相比，無明顯差異(P>0.05)。 (2)實驗第12周末各組生化檢測模型組血TP、Alb較正常組明顯降低(P<0.01)；兩治療組TP、Alb與模型組相比明顯升高(P<0.01)；兩治療組之間相比無明顯差異(P>0.05)；模型組與正常組相比，血清TC、TG、LDL均明顯增高(P<0.01)，HDL則明顯降低(P<0.01)；兩治療組與模型組相比，血清TC、TG、LDL明顯降低(P<0

10、.01)，而HDL則顯著升高(P<0.01)；兩治療組之間無明顯差異(P>0.05)；模型組血清BUN、Scr與正常組相比顯著升高(P<0.01)；兩治療組與模型組相比，血清BUN、Scr明顯降低(P<0.01)；兩治療組之間無明顯差異(P>0.05)；模型組血液粘稠度(ηb、ηp、Fig、HCT)與正常組相比顯著升高(P<0.01)；兩治療組與模型組相比，血液粘稠度(ηb、ηp、Fig、HCT)明顯降低(P<0.01)；兩治療組之間無

11、明顯差異(P>0.05)。 (3) 腎組織病理形態(tài)學(xué)觀察光鏡檢查：模型組腎小球基底膜彌漫增厚，毛細血管腔狹窄或消失，腎小球部分代償性增大，可見腎小球硬化；兩個治療組與模型組相比，上述病理改變明顯減輕，腎小球基底膜節(jié)段性增厚，毛細血管腔部分狹窄，多數(shù)毛細血管腔開放；腎舒康組較雷公藤多甙組基底膜增生稍輕。電鏡觀察：模型組腎小球毛細血管基底膜增厚明顯，薄厚不均，腎小球基底膜上皮下大量電子致密物沉積，上皮細胞足突腫脹，排列紊亂，足突廣泛

12、融合。兩治療組腎小球毛細血管基底膜輕中度增厚，呈丘狀，部分上皮細胞足突腫脹、融合。腎舒康組與雷公藤多甙組相比，基底膜增厚、足突融合程度稍輕。免疫熒光觀察：模型組IgG沿腎小球毛細血管壁呈細顆粒狀、高強度沉積(++++)，腎舒康組與雷公藤組高倍鏡下呈細顆粒狀、中低強度(++～+++)沉積。 結(jié)論： 1 腎舒康可以減少AHN大鼠24h尿蛋白含量，提高白蛋白水平，降低尿素氮、血肌酐，保護腎功能。 2 腎舒康可以減低血液