五肽化合物PLNPK對(duì)被動(dòng)型Heymann腎炎的治療作用及機(jī)理研究.pdf

1、目的：建立大鼠被動(dòng)型Heymann腎炎(PHN)模型，研究五肽化合物PLNPK對(duì)大鼠PFIN的治療作用，初步探討其作用機(jī)制。 方法：1.制備大鼠FX1A抗原，兔皮內(nèi)免疫制備兔抗大鼠FX1A的抗血清，免疫雙向擴(kuò)散法檢測(cè)抗血清效價(jià)；大鼠尾靜脈注射不同劑量的抗血清，并設(shè)立正常對(duì)照。每?jī)芍軝z測(cè)各組大鼠24hrs尿蛋白、血清肌酐(CR)、尿素氮(BUN)、總甘油三脂(TC)、總膽固醇(TG)、白蛋白(ALB)等指標(biāo)，觀察各組腎臟病理學(xué)的改

2、變，確定建立PHN模型所用抗FX1A抗血清的最適劑量。2.大鼠尾靜脈注射兔抗大鼠FX1A抗血清，建立大鼠被動(dòng)型Heymann腎炎模型。尾靜脈注射次日腹腔注射PLNPK，持續(xù)10周。每?jī)芍軝z測(cè)各組大鼠24hrs尿蛋白、血清CR、BUN、TC、TG、ALB，觀察PLNPK對(duì)PHN大鼠尿蛋白及腎臟功能的影響；觀察PLNPK對(duì)PHN大鼠腎指數(shù)的影響；腎臟HE染色觀察PLNPK對(duì)PHN大鼠病理學(xué)的影響；腎臟PASM染色觀察PLNPK對(duì)PHN大鼠腎

3、臟基底膜成分的影響。3.透射電鏡檢測(cè)PLNPK對(duì)PHN大鼠足細(xì)胞損傷的影響；RT-PCR和WesternBlot檢測(cè)PLNPK對(duì)PHN大鼠足細(xì)胞nephrin和podocinmRNA和蛋白表達(dá)的影響；ELISA檢測(cè)PLNPK對(duì)PHN大鼠C5b-9生成的影響；間接免疫熒光法檢測(cè)PLNPK對(duì)PHN大鼠腎臟IgG沉積的影響。 結(jié)果：1.免疫雙向擴(kuò)散結(jié)果顯示兔抗大鼠FX1A抗血清效價(jià)達(dá)到1:32。3ml抗血清注射組大鼠24hrs尿蛋白及

4、BUN、CR、TC、TG升高，ALB降低，與正常對(duì)照組比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。3ml抗血清注射組大鼠腎臟病理?yè)p傷明顯，出現(xiàn)基底膜彌漫性增厚；1.6ml、2ml抗血清注射組大鼠24h尿蛋白及血清BUN、CR、TC、TG、ALB變化幅度較小，且有恢復(fù)趨勢(shì)，病理改變不明顯；3.6ml抗血清注射組大鼠死亡率較高，病理偶有蛋白管型出現(xiàn)。確定3ml抗血清為建立PHN模型的最適劑量。2.PLNPK(100、200、400μg/kg/d)可

5、以顯著降低PHN大鼠的24hrs尿蛋白水平(P<0.05)；PLNPK(100、200、400μg/kg/d)可以顯著降低PHN大鼠血清TC、TG、BUN、CR水平(P<0.05)，并顯著升高PHN大鼠血清ALB水平(P<0.05)；病理結(jié)果表明：PLNPK可以改善PHN大鼠腎臟的病理?yè)p傷，減少毛細(xì)血管壁增厚和上皮細(xì)胞腫脹現(xiàn)象。3.PLNPK(100、200、400μg/kg/d)可以改善PHN大鼠足細(xì)胞損傷；可以明顯升高PHN大鼠ne

6、phrin和podocin的蛋白表達(dá)(P<0.05)；ELISA結(jié)果表明，PLNPK(100、200、400μg/kg/d)可以明顯減少PHN大鼠尿中C5b-9含量(P<0.05)；并減少PHN大鼠腎臟IgG沉積現(xiàn)象。 結(jié)論：PLNPK可以通過(guò)減少PHN大鼠腎臟IgG的沉積，進(jìn)一步減少C5b-9的生成，減輕腎組織免疫損傷，增高足細(xì)胞上裂孔蛋白nephrin和podocin的表達(dá)，改善足細(xì)胞的損傷，從而達(dá)到能有效地減少大量蛋白尿及