安神方治療失眠癥的療效觀察及相關(guān)機(jī)制研究.pdf

1、背景: 自古以來，人類就對(duì)睡眠和夢(mèng)產(chǎn)生了濃厚的興趣。從西方的佛洛依德所著《夢(mèng)的解析》開始，人類對(duì)睡眠和夢(mèng)的探究從來沒有停止過。睡眠作為人生命的重要組成部分，對(duì)人體保持充沛的精力體力，維持神經(jīng)系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)功能正常均具有重要意義。 近年來，經(jīng)濟(jì)社會(huì)變革加速，人們的生活工作節(jié)奏均大幅加快，負(fù)面情緒引起的精神緊張焦慮、抑郁更是頻繁發(fā)生，導(dǎo)致失眠癥發(fā)生日益頻繁。失眠（insomnia）是指睡眠的始發(fā)（sleep on

2、set）和睡眠維持（sleep maintenance）發(fā)生障礙，致使睡眠質(zhì)量不能滿足個(gè)體生理需要而明顯影響患者白天活動(dòng)（如白天困倦乏力、記憶力注意力下降等）的一種睡眠障礙綜合征。 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)失眠的研究發(fā)現(xiàn)睡眠的發(fā)生和維持與視交叉上核、下丘腦、腦干網(wǎng)狀上行系統(tǒng)以及松果體等部位，與乙酰膽堿（ACH）、去甲腎上腺素（NE）、多巴胺（DA）、單胺類、氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)以及退黑激素（melatonin，MT）、前列腺素（Prostagla

3、ndin，PG）、白介素（interleukin，IL）等物質(zhì)，均存在密切聯(lián)系。 目前失眠癥的臨床治療仍以BZD類鎮(zhèn)靜催眠藥物為主，在改善失眠癥狀的同時(shí)，往往伴有不同程度毒副作用并容易形成藥物依賴。祖國中醫(yī)藥的整體辯證論治方法，調(diào)整人體機(jī)能狀態(tài)的同時(shí)達(dá)到改善睡眠的治療方法，為失眠癥患者帶來了福音。導(dǎo)師陳寶田教授在研讀中醫(yī)經(jīng)典《傷寒論》過程中，結(jié)合臨床實(shí)踐在“柴胡桂枝湯”的基礎(chǔ)上創(chuàng)立了“安神方”，治療失眠癥療效確切，同時(shí)對(duì)改善患者

4、焦慮、抑郁等精神疾患亦有療效。在前期臨床觀察的基礎(chǔ)上，設(shè)計(jì)本實(shí)驗(yàn)旨在系統(tǒng)地觀察安神方治療失眠癥的臨床療效，并進(jìn)一步通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)探討安神方治療失眠癥的作用機(jī)理，為安神方的開發(fā)提供可靠的理論和臨床依據(jù)。 第一章、安神方治療失眠癥臨床觀察。 目的：通過臨床觀察探討安神方治療失眠癥的臨床效果。觀察失眠癥癥侯療效，臨床整體療效以及多導(dǎo)睡眠圖（PSG）檢查客觀結(jié)果，客觀的評(píng)價(jià)安神方治療失眠癥的效果。 方法： 1、病例

5、與分組符合納入標(biāo)準(zhǔn)的失眠癥患者80例，隨機(jī)方法分為安神方治療組和棗仁安神膠囊對(duì)照組。 2、用藥治療組安神方顆粒劑每日1劑，1次/晚；對(duì)照組棗仁安神膠囊每次4粒，1次/晚。睡前1小時(shí)服藥，時(shí)間4周。（安神方，由南方醫(yī)院中藥房提供，由廣東一方制藥生產(chǎn)，許可證號(hào)：粵zbx20060360；棗仁安神膠囊，由南方醫(yī)院藥房提供，貴州同濟(jì)堂制藥有限公司生產(chǎn)，國藥準(zhǔn)字號(hào)220010033）。 3、中醫(yī)癥候療效評(píng)價(jià)在中醫(yī)癥候評(píng)分基礎(chǔ)上，比

6、較治療前后主要癥狀（睡眠時(shí)間，入睡困難，易醒，多夢(mèng)，困倦乏力）改善等級(jí)，采用非參數(shù)檢驗(yàn)方法，分析評(píng)價(jià)各組癥狀的改善。 4、臨床整體療效評(píng)價(jià)根據(jù)治療前后總評(píng)分，計(jì)算反應(yīng)總體改善情況的“療效指數(shù)”，評(píng)定每例患者改善等級(jí)，以此評(píng)價(jià)兩組治療的整體療效。 5、臨床多導(dǎo)睡眠圖療效評(píng)價(jià)以分鐘（min）為單位記錄兩組治療前后總睡眠時(shí)間（TST）、睡眠潛伏時(shí)間、覺醒次數(shù)，淺睡眠時(shí)間（S1+S2），深睡眠時(shí)間（S3+S4）及REM睡眠時(shí)間。

7、分別進(jìn)行治療前差異比較（兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)）、組內(nèi)治療前后癥狀比較（兩配對(duì)樣本t檢驗(yàn)）、治療后組間癥候療效比較（協(xié)方差分析）。 6、安全性評(píng)價(jià) 治療前后檢查體溫，心率，血壓，呼吸；血、尿、便常規(guī)檢查；肝、腎功能檢查；心電圖檢查； 7、統(tǒng)計(jì)分析采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS13．0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理和分析。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)計(jì)量資料采用均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示。治療前后劑量資料比較采用兩配對(duì)樣本t檢驗(yàn)；兩組間計(jì)量資料比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；治

8、療后組間癥候療效比較采用協(xié)方差分析；等級(jí)資料分布情況采用秩和檢驗(yàn)及非參數(shù)檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料以百分率表示，采用卡方檢驗(yàn)。所有統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)均以P<0．05作為差異有顯著性差異的界限。 結(jié)論： 1、安神方治療對(duì)改善“易醒，困倦乏力”癥狀的療效優(yōu)于對(duì)照組，治療失眠癥的整體療效優(yōu)于對(duì)照組。 2、安神方對(duì)“總睡眠時(shí)間、覺醒次數(shù)、深睡眠時(shí)間、REM睡眠時(shí)間”癥狀的改善，具有顯著療效；與對(duì)照組比較，改善“深睡眠時(shí)間、REM睡眠時(shí)間”的療

9、效顯著。其對(duì)睡眠結(jié)構(gòu)的調(diào)整主要是增加了“深睡眠時(shí)間”及“REM睡眠時(shí)間”；致使“總睡眠時(shí)間”增加。 3、安全性指標(biāo)觀察 各項(xiàng)檢查指標(biāo)無異常。 第二章、安神方治療失眠癥的相關(guān)機(jī)制研究。 一、安神方對(duì)失眠造模大鼠中樞氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)的影響。 目的：觀察安神方對(duì)大鼠中樞氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)含量的影響，探討其治療失眠癥的機(jī)理。 方法： 1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組：清潔級(jí)Wistar大鼠60只，體重（200±2

10、0g），南方醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)：（粵）2006-0015。按隨機(jī)方法分成高劑量組、中、低劑量組和生理鹽水對(duì)照組，共4組。 2、給藥：高劑量組大鼠每天按40g．Kg-1灌胃，中劑量組大鼠每天按20g．Kg-1灌胃，低劑量組大鼠每天按10g．Kg-1灌胃，生理鹽水組給予等量生理鹽水灌胃。失眠造模同時(shí)連續(xù)給藥15天。 3、失眠大鼠模型制備方法本實(shí)驗(yàn)采用‘限制運(yùn)動(dòng)法’制作大鼠失眠模型：將大鼠置于自制的大鼠運(yùn)動(dòng)限制儀內(nèi)

11、，通過移動(dòng)插片控制大鼠的活動(dòng)空間。每日束縛制動(dòng)1次，第一次4h，其后每次增加1h，連續(xù)15d完成。大鼠在制動(dòng)期間禁食、禁水。 4、中樞氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)檢測(cè)方法 處死并分離大鼠海馬及下丘腦。稱重，玻璃勻漿器勻漿化；離心取上清液，采用“高效液相色譜熒光檢測(cè)法”檢測(cè)中樞氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)。 5、儀器和試劑。 儀器及試劑：DIONEX Summit高效液相色譜儀（美國DIONEX公司），Chromeleon色譜工作站（美國

12、DIONEX公司），RF2000熒光檢測(cè)器（美國DIONEX公司），PHS-2C精密酸度計(jì)（上海理達(dá)儀器廠），冷凍離心機(jī)（Avanti 30），電子天平（BA 110S）。谷氨酸（Glu）、γ-氨基丁酸（GABA）、OPA（內(nèi)含2-ME）均購自美國SIGMA公司，批號(hào)分別為43907190、026K07361、116K5005；乙腈購自美國TEDIA公司；其余試劑均為市售分析純。 6、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)計(jì)量資料采用（x±s）表示；采用統(tǒng)計(jì)

13、軟件SPSS13．0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)描述和分析。多組間比較采用單因素方差分析（One-Way ANOVA）檢驗(yàn)；方差齊時(shí)采用LSD方法檢驗(yàn)；方差不齊時(shí)采用非參數(shù)Kruskal-Wallis檢驗(yàn)。所有統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)均以P<0．05作為差異有顯著性的界限。 結(jié)論：安神方治療組能增加大鼠海馬、下丘腦中γ-氨基丁酸（GABA）含量，降低谷氨酸（GLU）含量；調(diào)節(jié)中樞氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)是安神方治療失眠癥的機(jī)制之一。 二、安神方對(duì)睡眠剝奪大鼠血清

14、皮質(zhì)醇的影響。 目的：觀察安神方對(duì)應(yīng)激條件下動(dòng)物的焦慮癥狀的調(diào)節(jié)作用。 方法： 1、動(dòng)物及分組清潔級(jí)Wistar大鼠30只，8周齡，雄性，體重（300±30g），南方醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)：（粵）2006-0015。隨機(jī)方法分為2組，每組15只。 2、試驗(yàn)藥物中藥安神方，由南方醫(yī)院中藥房提供。治療組大鼠每天按20g．Kg-1灌胃（劑量按成人換算），生理鹽水組給予等量生理鹽水；每天灌胃1次。

15、 3、睡眠剝奪大鼠模型制備 采用“改良多平臺(tái)睡眠剝奪法”進(jìn)行睡眠剝奪（sleep deprivation，SD）。室溫保持20-25℃，正常晝夜光照，每日更換睡眠剝奪用水，保持自由進(jìn)食條件。 4、試驗(yàn)步驟：持續(xù)睡眠剝奪72h，兩組分別在睡眠剝奪（SD）0h，24h，48h和72h時(shí)，記錄各組動(dòng)物體重，并采血檢測(cè)血清皮質(zhì)醇。血清皮質(zhì)醇測(cè)定方法：于早晨7時(shí)經(jīng)尾靜脈取血0．5ml，置離心管中以3000r/min離心10min，取上清液

16、保存于低溫冰箱（-60℃）待檢測(cè)。 5、資料整理與統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS13．0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理和分析。治療前后指標(biāo)差值采用協(xié)方差分析，不同時(shí)間點(diǎn)數(shù)據(jù)變化采用重復(fù)測(cè)量數(shù)據(jù)的方差分析和獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)進(jìn)行比較。所有統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)分析均以P<0．05作為差異有顯著性的界限。 結(jié)論： 1、治療組體重減輕速度慢于生理鹽水對(duì)照組。 2、治療組血清皮質(zhì)醇含量增加的速度慢于生理鹽水對(duì)照組。 3、安神方治療可以減