MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通道在重癥急性胰腺炎發(fā)病機制中的作用.pdf

1、該課題分以下四個部分：第一部分重癥急性胰腺炎大鼠MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的動態(tài)變化.目的：闡明SAP時大鼠胰腺及肺臟組織MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的變化規(guī)律.方法：以胰膽管逆行注射5％?；悄懰徕c建立SD大鼠的SAP模型，將SD大鼠56只隨機分為對照組（即造模前）、造模后0.5h、1h、3h、6h、12h、24h共7組，采用Western blot法檢測胰腺及肺臟組織p38MAPK、JNK活性的變化.結(jié)果：造模前能夠檢測到胰腺及肺臟組織p38MAP

2、K的基礎(chǔ)活性，分別為14.21±2.35、15.17±1.96，造模后胰腺組織的p38MAPK活性即迅速增高，至3小時達到高峰，為66.36±4.38，6小時及12小時仍維持較高的水平，分別為44.68±3.21和36.71±1.81，而肺臟組織的p38MAPK活性在造模后0.5小時無明顯變化，1小時點開始升高，6小時點達到高峰，為59.87±5.45，兩者在24小時點處的p38MAPK活性仍高于對照組，分別為26.45±2.37和29

3、.24±4.53，造模后各時間點與造模前比較均有統(tǒng)計學(xué)差異，JNK的活性僅在造模后12小時點處有增高，其余時間點檢測不到JNK的活性.結(jié)論：MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路其中特別是p38MAPK是SAP發(fā)病早期過程中的重要信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，其長時間的持續(xù)活化對于SAP的病程發(fā)展具有重要意義.第二部分MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路抑制劑CNI-1493對重癥急性胰腺炎大鼠干預(yù)作用的實驗研究.目的：研究CNI-1493對SAP大鼠的干預(yù)作用，為其臨床應(yīng)用提供實驗依

4、據(jù).方法：84只SD大鼠隨機分為：（1）假手術(shù)對照（SO）組;（2）SAP+NS組;（3）SAP+CNI-1493組，其中SAP+CNI-1493組造模前1小時靜脈注射CNI-1493（10mg/Kg），SAP+NS組給予同劑量的生理鹽水.每組各取10只大鼠觀察24h內(nèi)存活率，其余每組18只大鼠，分為造模后3、6、12h三個時間點，使用全自動生化分析檢測血淀粉酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、血尿素氮（BUN），采用ELISA方法檢測血清TNF

5、-α、IL-1β，測定動脈血氧分壓、肺臟溫/干重比以及肺泡灌洗液的白細胞計數(shù)、蛋白定量，并對胰腺、肺臟組織作常規(guī)的病理學(xué)檢查.第三部分CNI-1493對重癥急性胰腺炎大鼠枯否細胞分泌促炎細胞因子功能的影響.目的：探討CNI-1493對SAP大鼠枯否細胞（KCs）分泌促炎細胞因子TNF-α和IL-1β功能的影響.方法：30只SD大鼠隨機分為：（1）假手術(shù)對照（SO）組;（2）SAP+NS組;（3）SAP+CNI-1493組.SAP+CNI

6、-1493組造模前1小時靜脈注射CNI-1493（10mg/Kg），SAP+NS組給予同劑量的生理鹽水.假手術(shù)或造模后12h后處死動物，利用密度梯度離心和選擇性粘附法分離出KCs，采用熒光實時定量PCR方法檢測KCs內(nèi)TNF-α和IL-1βmRNA的表達，采用Western blot法檢測p38MAPK和JNK活化情況，并用ELISA法檢測血漿的TNF-α和IL-1β含量.結(jié)論：MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，其中可能主要是p38MAPK介導(dǎo)了S

7、AP大鼠的KCs促炎細胞因子TNF-α和IL-1β的分泌，抑制此信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路可以減少SAP大鼠促炎細胞因子的產(chǎn)生，對于SAP尤其是SIRS防治可能具有重要意義.第四部分CNI-1493對重癥急性胰腺炎大鼠多形核粒細胞功能的影響.目的：探討CNI-1493對大鼠SAP時外周血多形核粒細胞功能影響.方法：54只SD大鼠隨機分為3組：（1）假手術(shù)對照（SO）組;（2）SAP+NS組;（3）SAP+CNI-1493組，SAP+CNI+1493組

8、造模前1小時靜脈注射CNI-1493（10mg/Kg），SAP+NS組給予同劑量的生理鹽水.每組分造模后3、6、12h三個時間點取血，用密度梯度法分離多形核粒細胞（Polymorphonuclear,PMN），用流式細胞儀功能測定呼吸爆發(fā)功能，用紫外分光光度計測定PMN釋放髓過氧化物酶（MPO）以及胰腺、肺臟組織MPO含量的變化情況.結(jié)論：CNI-1493可以明顯抑制SAP時PMN的病理性功能亢進及向組織的趨化浸潤，可能有益于SAP的治

9、療.三、總結(jié).該研究以SD大鼠胰膽管逆行注射5％?；悄懰徕c建立SAP模型，發(fā)現(xiàn)MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路其中特別是p38MAPK是SAP發(fā)病早期過程中的重要信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，其長時間的持續(xù)活化對于SAP的病程發(fā)展具有重要意義.在SAP大鼠模型上預(yù)先給予MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路抑制劑CNI-1493，能夠減輕炎癥反應(yīng)，減輕SAP并發(fā)的肺損傷，還能夠抑制KCs分泌促炎細胞因子TNF-α和IL-1β，并且抑制多形核粒細胞的病理性功能亢進及向組織趨化浸潤，提