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文檔簡介
1、背景與目的
炎癥因子是重癥急性胰腺炎(severe acute panereatitis,SAP)發(fā)生和進展的重要因素,也是早期診斷SAP和預測其嚴重性的指標。趨化因子Fraetalkme(FKN)既有趨化分子的活性又能發(fā)揮粘附分子的作用,這種獨特的雙重功效使其參與了多種炎癥反應,造成組織損傷。目前國內外尚鮮見FKN參與SAP發(fā)生發(fā)展的報道。本課題擬在大鼠SAP動物模型上,明確FKN是否參與SAP的發(fā)生與發(fā)展,并初步探索其作用
2、機制。
方法
1.制作SAP大鼠動物模型,應用酶聯(lián)免疫吸附試驗(Enzyme-linkedimmunosorbent assay,ELISA)檢測SAP大鼠血清中FKN濃度;應用逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)、蛋白質免疫印跡法(Western blot)和免疫組化法檢測SAP大鼠胰腺、肺臟和腎臟組織中FKN的表達:
2.制備以腺病毒做載體的FKN siRNA,并將其轉入雨蛙素刺激的大鼠胰腺腺泡AR42J
3、細胞,應用RT-PCR和Western blot檢測FKN的表達;
3.注射FKN siRNA的SAP大鼠,應用RT-PCR、Western blot和免疫組化法觀察FKN siRNA對SAP炎癥和Jak/Stat信號傳導通路的影響。
結果
1.成功制備SAP大鼠模型,并發(fā)現(xiàn)其血清FKN濃度在制模16小時達最高1.4lng/ml,高于正常對照組(P<0.05),SAP大鼠的胰腺、肺臟和腎臟組織中均有FKN的
4、蛋白和mRNA過度表達,高于正常對照組(p<0.05);
2.成功制備并篩選有效FKN siRNA,將其轉入雨蛙素刺激的AR42J細胞,RT-PCR和Western blot法檢測到FKN表達下降(p<0.05),低于雨蛙素刺激的AR42J細胞;
3.注射FKN siRNA的SAP大鼠,血清FKN濃度下降至0.63 ng/ml,低于SAP大鼠(p<0.05),同時,RT-PCR、Western blot和免疫組化檢測
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