DIDS對(duì)酒精所致大鼠胃粘膜損傷保護(hù)作用的研究.pdf

1、目的：酒精是常見的外源性胃粘膜損傷因素，酒精誘發(fā)的大鼠胃粘膜損傷是研究胃粘膜損傷及胃粘膜保護(hù)機(jī)制的經(jīng)典模型。多年來，關(guān)于胃粘膜損傷的研究主要集中在如何削減酒精、阿司匹林和胃酸等損傷因素對(duì)胃粘膜的損害作用和如何加強(qiáng)內(nèi)源性前列腺素等胃粘膜的保護(hù)機(jī)制上。本實(shí)驗(yàn)采用酒精誘發(fā)大鼠急性胃粘膜損傷模型，研究具有抗氧化和抗凋亡作用的陰離子交換蛋白2(AE2)抑制劑DIDS對(duì)胃酸分泌的影響和對(duì)胃粘膜損傷的保護(hù)作用，探討其可能的作用機(jī)制，為開發(fā)新型抗胃粘膜

2、損傷藥物提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：通過測(cè)定大鼠基礎(chǔ)胃酸分泌和組胺刺激性胃酸分泌，研究DIDS對(duì)大鼠基礎(chǔ)胃酸分泌和組胺刺激性胃酸分泌的影響。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組(每組5-7只)?；A(chǔ)胃酸分泌測(cè)定：大鼠烏拉坦(1.25g/Kg)腹腔注射麻醉，上腹部小切口，在盡可能不損傷胃的情況下結(jié)扎大鼠胃幽門和食管胃連接部，絲線縫合關(guān)腹。1小時(shí)后再次開腹，切取完整的胃，胃內(nèi)容物用濃度為0.1N的NaOH滴定，測(cè)定胃內(nèi)容物的酸堿當(dāng)量，間接計(jì)算出

3、胃酸分泌量。實(shí)驗(yàn)組的DIDS(50mg/Kg)在幽門和胃食管連接部結(jié)扎前5分鐘靜脈注射，對(duì)照組注射等量生理鹽水。組胺刺激性胃酸分泌測(cè)定：組胺(5mg/Kg)大鼠皮下注射15分鐘后，大鼠烏拉坦麻醉，開腹，在幽門和胃食管連接部結(jié)扎后取胃，用0.1N的NaOH滴定胃內(nèi)容物，計(jì)算胃酸分泌量。實(shí)驗(yàn)組的DIDS(50mg/Kg)在皮下注射組胺前5分鐘靜脈注射，對(duì)照組注射等量生理鹽水。用1ml無水酒精灌胃誘導(dǎo)大鼠急性胃粘膜損傷模型。DIDS預(yù)處理組在

4、酒精灌胃前5分鐘予以DIDS(50mg/Kg)靜脈注射。灌胃1小時(shí)后開腹取胃，胃內(nèi)容物測(cè)定胃酸含量。胃粘膜組織進(jìn)行大體觀察。部分胃組織用4％福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋，切片HE染色后光鏡下觀察，并進(jìn)行COX-2免疫組織化學(xué)檢查。一部分胃組織用2.5％戊二醛固定，超薄切片做透射電鏡檢查。其余部分胃組織-70℃保存，測(cè)定胃粘膜的MPO活性和MDA水平，并用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)PGE2水平。 結(jié)果：DIDS明顯抑制大鼠組胺刺激性胃酸分泌

5、，但對(duì)大鼠基礎(chǔ)胃酸分泌沒有明顯影響。無水酒精灌胃引起大鼠胃酸分泌的輕度增加和明顯的胃粘膜損傷，損傷包括粘膜出血、粘膜上皮剝脫、腺體損傷和中性粒細(xì)胞浸潤等。損傷的胃粘膜組織中MPO活性和MDA水平明顯升高，COX-2表達(dá)增加，而PGE2水平反而下降。在大體、光鏡和電鏡下觀察，DIDS預(yù)處理明顯減輕胃粘膜的損傷程度，胃粘膜上皮剝脫明顯減輕，中性粒細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞浸潤明顯減少，粘膜出血范圍變得局限。DIDS抑制酒精引起的胃酸分泌并且逆轉(zhuǎn)MP