大鼠胃粘膜損傷的隨齡變化.pdf

1、目的： 1、比較大鼠胃粘膜組織結(jié)構(gòu)和胃蛋白酶含量的隨齡變化。 2、應(yīng)用阿司匹林及奧美拉唑制備老齡和非老齡大鼠的損傷和保護(hù)模型。比較損傷和保護(hù)因素對(duì)不同月齡大鼠胃粘膜和血液NO、TNF含量影響，并探討其作用機(jī)制。 方法：選擇月齡3個(gè)月，體重200-300g及月齡22個(gè)月，體重600-800g清潔級(jí)健康Wistar大鼠各18只，分別隨機(jī)分為3組：老齡、非老齡阿司匹林損傷組，老齡、非老齡奧美拉唑保護(hù)組和老齡、非老齡對(duì)照

2、組。 1、光鏡下觀察老齡、非老齡對(duì)照組大鼠胃粘膜腺體及肌層厚度，固有腺體數(shù)量及炎性細(xì)胞浸潤(rùn)程度。胃蛋白酶試劑盒生化檢測(cè)胃粘膜組織胃蛋白酶活力。免疫組化方法檢測(cè)大鼠粘膜PCNA的表達(dá)。 2、老齡、非老齡阿司匹林損傷組大鼠分別用100mg/kg劑量阿司匹林灌胃；老齡、非老齡保護(hù)組大鼠分別用20mg/kg劑量奧美拉唑灌胃。老齡、非老齡對(duì)照組大鼠分別給予生理鹽水灌胃。處死前眼球內(nèi)眥靜脈取血并分離血漿和血清，檢測(cè)血漿NO含量、NO

3、S、iNOS及cNOS活力。放射免疫法測(cè)血清TNF含量。分別按Guth評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)大體觀察及whittle評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)光鏡下觀察，比較各組大鼠胃粘膜損傷情況。 結(jié)果： 1、老齡對(duì)照組大鼠胃粘膜色澤蒼白、表面光滑、皺襞規(guī)整、表面可見附著較多粘液。非老齡對(duì)照組大鼠胃粘膜色澤橘紅、表面光滑、皺襞規(guī)整、表面亦附著較多粘液。老齡和非老齡對(duì)照組大鼠胃體和胃竇粘膜均未見腸上皮化生、不典型增生及腫瘤的發(fā)生。老齡對(duì)照組大鼠胃竇粘膜固有層腺體數(shù)量減

4、少、腺體間隙增大，固有層腺體層數(shù)減少，甚至消失；非老齡對(duì)照組大鼠胃竇粘膜固有腺體飽滿清晰、層教較多。老齡對(duì)照組大鼠胃竇粘膜厚度高于非老齡大鼠的胃竇粘膜厚度，但老齡對(duì)照組大鼠胃體粘膜厚度與非老齡對(duì)照組大鼠胃體粘膜厚度相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。老齡對(duì)照組大鼠的胃竇、胃體的粘膜肌層較非老齡對(duì)照組大鼠的粘膜肌層增厚，鏡下可見粘膜肌層向粘膜固有層呈分支狀插入腺體之間。老齡對(duì)照組大鼠胃液PH值較非老齡對(duì)照組PH值略高，但兩者比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)

5、。老齡對(duì)照組大鼠胃粘膜組織的蛋白酶含量下降，與非老齡大鼠比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差別(P＜0.05)。非老齡對(duì)照組大鼠胃粘膜中PCNA陽(yáng)性細(xì)胞主要定位于胃腺頸部增殖細(xì)胞帶，表達(dá)規(guī)律，細(xì)胞核染色陽(yáng)性，粘膜表面上皮細(xì)胞為陰性。陽(yáng)性信號(hào)較均一，呈顆粒樣或片狀棕黃色染色，有時(shí)胞漿也有輕度黃染或呈淡紫色。老齡對(duì)照組大鼠PCNA表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞也呈顆粒狀或片狀棕黃色染色，陽(yáng)性表達(dá)的胃頸腺增殖細(xì)胞帶厚度降低且位置下移，偏向于粘膜肌層。老齡對(duì)照組大鼠較非老齡對(duì)照組大鼠

6、NO、NOS、iNOS及TNF含量升高，cNOS含量下降，統(tǒng)計(jì)學(xué)差別明顯，這說(shuō)明伴隨增齡，由cNOS產(chǎn)生的內(nèi)源保護(hù)性NO含量下降，而由iNOS產(chǎn)生NO含量升高，且后者升高的量大于前者下降的量，從而表現(xiàn)為總體NO含量升高。NO和TNF含量升高推測(cè)與老化后自由基產(chǎn)生過(guò)多或清除減少引起細(xì)胞結(jié)構(gòu)破壞而功能喪失，最終導(dǎo)致機(jī)體的衰老。 2、老齡和非老齡阿司匹林損傷組大鼠胃粘膜均可見散在點(diǎn)(線、片)狀出血點(diǎn)(帶)，老齡損傷組大鼠損傷面積大、范

7、圍廣，損傷指數(shù)高于非老齡大鼠損傷指數(shù)(P＜0.05)。鏡下觀察兩組損傷大鼠粘膜粘膜腺體有不同程度的充血、水腫、上皮缺損、連續(xù)性破壞，伴有不同程度的炎性滲出及炎癥細(xì)胞(中性粒、淋巴和單核細(xì)胞)浸潤(rùn)。老齡損傷組大鼠鏡下whittle評(píng)分高于非老齡損傷組大鼠whittle評(píng)分(P＜0.05)。給予奧美拉唑預(yù)保護(hù)后再給予阿司匹林灌胃，兩保護(hù)組大鼠胃粘膜亦可見粘膜出血和糜爛，但損傷程度較相應(yīng)的老齡和非老齡損傷組輕，糜爛及出血范圍減少，部分大鼠粘膜

8、僅見少量點(diǎn)狀出血。鏡下觀察發(fā)現(xiàn)給予奧美拉唑保護(hù)后兩組大鼠粘膜充血水腫、上皮缺損破壞及炎性滲出、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)程度均較單純損傷組程度輕。分別對(duì)老齡、非老齡對(duì)照組、損傷組及保護(hù)組大鼠進(jìn)行組間分析發(fā)現(xiàn)：老齡、非老齡損傷組大鼠的TNF含量、NO含量、NOS活力及iNOS活力升高，cNOS活力下降，與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差別。老齡、非老齡保護(hù)組與相對(duì)應(yīng)的阿司匹林損傷組比較，NO含量降低，但仍高于相應(yīng)對(duì)照組的NO值(P＜0.05)；老齡和非老齡保護(hù)組N

9、OS活力低于損傷組，高于對(duì)照組，但統(tǒng)計(jì)學(xué)比較無(wú)明顯差別(P＞0.05)；老齡保護(hù)組iNOS活力較損傷組下降(P＜0.01)，較對(duì)照組升高(P＞0.05)，非老齡保護(hù)組iNOS活力較損傷組降低較對(duì)照組升高(P＜0.01)；老齡、非老齡保護(hù)組cNOS均較相應(yīng)的損傷組升高(P＜0.05)較相應(yīng)的對(duì)照組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差別(P＞0.05)；老齡、非老齡保護(hù)組TNF含量較損傷組降低(P＜0.05)，但與對(duì)照組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。胃粘膜損

10、傷指數(shù)與iNOS活力、NO含量及TNF含量呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為0.6871、0.7338、0.7824。胃粘膜損傷指數(shù)與cNOS活力呈負(fù)相關(guān)，相關(guān)系數(shù)為-0.7458。胃粘膜損傷指數(shù)與NOS活力無(wú)關(guān)。 結(jié)論： 1、老齡大鼠胃腺體萎縮、粘膜肌層增厚的發(fā)生率增加，胃蛋白酶原分泌減少，胃頸腺干細(xì)胞的增殖能力下降。 2、老齡大鼠胃粘膜對(duì)損傷的敏感性增加，修復(fù)能力下降。 3、阿司匹林通過(guò)降低cNOS活力，升高i