苗藥復(fù)方二巖虎果湯藥效學(xué)及拆方研究.pdf

1、目的: 本研究的目的在于通過(guò)實(shí)驗(yàn)研究確定二巖虎果湯的藥效及其藥效基礎(chǔ)上的最佳處方，優(yōu)化最佳提取方法，為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)出新型治咳喘的藥物奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　方法: 采用小鼠濃氨水引咳法觀察二巖虎果湯的止咳作用，采用酚紅排泌法觀察其祛痰作用，采用豚鼠0.1％磷酸組胺和2%氯化乙酰膽堿等量混合液(1∶1)引喘法觀察其平喘作用，采用二甲苯致小鼠耳腫脹法觀察其抗炎作用；采用最大耐受量試驗(yàn)，對(duì)二巖虎果湯的安全性進(jìn)行初步評(píng)價(jià)；選擇小鼠止咳（濃氨水引

2、咳法）、抗炎（二甲苯致小鼠耳腫脹法）兩項(xiàng)藥理指標(biāo)，考察二巖虎果湯的水、35％、55％、75％和95％乙醇五種提取溶劑提取物的藥效，選擇適宜的提取溶劑；采用撤藥分析法對(duì)二巖虎果湯進(jìn)行拆方研究,比較各配伍組方對(duì)小鼠的止咳、抗炎藥理作用,觀察各味藥對(duì)整方藥效的影響；利用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，對(duì)二巖虎果湯進(jìn)行拆方研究，選擇L16（45）正交表，以二巖虎果湯中4味藥為因素，分別選取原方藥量的0、0.5、1、1.5倍量構(gòu)成4個(gè)水平，對(duì)所得16個(gè)處方分別進(jìn)行

3、止咳、抗炎藥理實(shí)驗(yàn)，探討二巖虎果湯配伍機(jī)制；使用高效液相色譜法，Diamonsil（R）鉆石 C18柱(5μm，250×4.6 mm)，甲醇:水(50:50)為流動(dòng)相，流速為1.0ml·min-1，柱溫30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)330nm，建立二巖虎果湯中石吊蘭素的含量測(cè)定方法；采用正交設(shè)計(jì)法，以浸膏得率和石吊蘭素含量為指標(biāo)，優(yōu)化二巖虎果湯的水提醇沉工藝，并對(duì)其止咳、抗炎作用進(jìn)行藥效學(xué)驗(yàn)證。
　　結(jié)果: 二巖虎果湯高、中劑量組能延長(zhǎng)小鼠咳嗽

4、潛伏期，高、中、低三個(gè)劑量組均能降低小鼠3min內(nèi)咳嗽次數(shù)（P＜0.05）；二巖虎果湯高、中劑量組能增加小鼠氣管酚紅排泌量( P<0.05)；二巖虎果湯高、中、低三個(gè)劑量組均能延長(zhǎng)豚鼠咳喘潛伏期（P＜0.05）；二巖虎果湯高、中、低三個(gè)劑量組均能降低小鼠耳腫脹率( P<0.05)。最大給藥量試驗(yàn)結(jié)果表明：二巖虎果湯小鼠灌胃最大給藥量為160 g·kg-1·d-1，按此量計(jì)算相當(dāng)于臨床成人口服一日等效劑量的80倍；二巖虎果湯小鼠腹腔注射最

5、大給藥量為40 g·kg-1·d-1。經(jīng)提取溶劑篩選，組方適宜提取溶劑為55%乙醇；經(jīng)撤藥拆方研究，方中各藥均對(duì)全方延長(zhǎng)咳嗽潛伏期、減少咳嗽次數(shù)、降低小鼠耳腫脹率作用有貢獻(xiàn)，其作用強(qiáng)弱順序?yàn)椋簬r豇豆>巖白菜>果上葉>虎杖；通過(guò)正交拆方試驗(yàn)配合多指標(biāo)綜合評(píng)價(jià)，各味藥對(duì)綜合藥效的影響大小是：A（巖豇豆）> B（巖白菜）> C（虎杖）> D（果上葉），由方差分析及直觀分析綜合得出二巖虎果湯的最佳配比為A4B4C3D2，即巖豇豆45g、巖白菜4

6、5g、虎杖30g、果上葉15g。經(jīng)高效液相色譜法考察，石吊蘭素在5—25μg/ml范圍內(nèi)成良好線性關(guān)系，r=0.9997，平均回收率為99.72%。二巖虎果湯的吸水率考察結(jié)果顯示，浸泡時(shí)間為75min，吸水率為1.5倍；水提工藝的結(jié)果顯示，各因素對(duì)水提結(jié)果的影響大小為：C（提取時(shí)間）>A（加水量）>B（提取次數(shù)），確定最優(yōu)提取方法為A2B1C1，即加水量10倍，提取1次，每次1h；醇沉工藝的結(jié)果顯示，各因素對(duì)醇沉結(jié)果的影響大小為：B（醇

7、沉濃度）>A（藥液濃縮比例）>C（靜置時(shí)間），確定最優(yōu)提取方法為A3B2C1，即提取液濃縮至藥液比例為2:1，醇沉濃度為75%，靜置12h；藥效學(xué)驗(yàn)證結(jié)果顯示，該水提醇沉法制備的藥液能延長(zhǎng)小鼠咳嗽潛伏期、減少咳嗽次數(shù)、降低小鼠耳腫脹率( P<0.05)，與原提取方法相比，無(wú)顯著性差異（P>0.05）。
　　結(jié)論: 二巖虎果湯具有止咳、祛痰、平喘、抗炎作用；小鼠急性毒性試驗(yàn)未見(jiàn)任何明顯不良反應(yīng)。經(jīng)過(guò)撤藥分析，該方組方合理，方中各藥配