加味四君子湯對嚴重燙傷大鼠細胞凋亡的影響.pdf

1、 目的：本研究主要是從細胞凋亡的角度探討四君子湯加味大黃對燙傷Wistar大鼠腸道屏障的保護作用及其作用機理。方法：1.實驗分組：實驗用Wistar大白鼠(瀘州醫(yī)學院動物實驗中心提供)于實驗前一周購入,體重(250±25)g,雌雄不限,健康；分籠飼養(yǎng),室溫在26℃、濕度55%的環(huán)境,自由攝食、飲水。隨機分為燙傷中藥治療組(n=25),燙傷對照組(n=25)和正常對照組(n=5)。分別設(shè)傷后12h、1天、3天、5天、7天5個時相,每個時

2、相設(shè)有5只大鼠。2.中藥制備：采用四君子湯加味大黃制備湯劑,生藥共重80g,其中黨參25g,茯苓20g,白術(shù)20g,甘草5g,大黃10g,加水300ml,文火煎制30分鐘,過濾濃縮至1.0g/ml,中藥制劑冰箱4℃保存,給藥前復溫。3.模型制作：參照文獻[1]方法致大鼠背部30%TBSAⅢ度燙傷,所有燙傷組及治療組大鼠均采用相同的處置方式,傷后立即給予腹腔注射乳酸林格氏液抗休克,創(chuàng)面涂磺胺嘧啶銀乳膏。治療組傷后6h開始在清醒狀態(tài)下經(jīng)口腔

3、置入灌胃針,緩慢注入所制備的加味四君子湯,每天2次,2ml/次,燙傷對照組和正常對照組以相同的方法灌注等量生理鹽水。4.標本采集及處理：于傷后各個時相,分別提取距大鼠回盲部2cm處小腸段約3cm及腸系膜淋巴結(jié)(MLNs)標本,4%多聚甲醛固定,脫水后常規(guī)石蠟包埋并切片,后進行HE染色及原位末端轉(zhuǎn)移酶標記技術(shù)(TUNEL) 檢測細胞凋亡。5.指標檢測及方法：①光鏡下觀察各組小腸粘膜及其上皮細胞在HE染色、TUNEL染色情況下組織病理學變化

4、并進行對比；②光鏡下觀察各組腸系膜淋巴結(jié)及其淋巴細胞在HE染色、TUNEL染色情況下組織病理學變化并進行對比；③計算燙傷后各組小腸粘膜上皮細胞不同時相的凋亡率,并進行統(tǒng)計學分析；④計算燙傷后各組腸系膜淋巴結(jié)淋巴細胞不同時相的凋亡率,并進行統(tǒng)計學分析。結(jié)果：1.燙傷組大鼠小腸粘膜及其上皮細胞、腸系膜淋巴結(jié)及其淋巴細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)損傷嚴重,治療組較燙傷組損傷程度輕；2.燙傷組及治療組的腸粘膜上皮細胞及腸系膜淋巴結(jié)淋巴細胞各時相的凋亡率較對照組升