氧化應(yīng)激與免疫功能抑制在高砷煤烘玉米粉致大鼠腎損傷中作用及銀杏葉片干預(yù)機(jī)制探討.pdf

1、目的：建立高砷煤烘玉米粉致大鼠腎損傷模型，探討免疫功能抑制和氧化應(yīng)激在砷致大鼠腎損傷中作用；采用銀杏葉片干預(yù)砷致大鼠腎損傷，探討其干預(yù)效果及可能機(jī)制，為砷致腎臟損害的防治提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：健康清潔Wistar大鼠90只，體重80～100g，按隨機(jī)數(shù)字法分為9組，每組10只，雌雄各半。1、建立高砷煤烘玉米粉致大鼠腎損傷模型：隨機(jī)分為4組，包括正常對(duì)照A組，低、中、高劑量染砷組（簡稱砷低、中、高劑量組），正常對(duì)照A組喂飼標(biāo)準(zhǔn)飼

2、料，砷低、中、高劑量組分別喂飼用高砷煤烘玉米粉為主要原料制備的含砷25、50、100mg/kg的飼料，喂養(yǎng)3個(gè)月。2、銀杏葉片拮抗砷中毒腎損傷大鼠實(shí)驗(yàn)研究：分為4組，包括正常對(duì)照A組（同1正常對(duì)照A組）、砷中毒A組（同1砷高劑量組）、銀杏葉片組（簡稱銀杏組，喂飼標(biāo)準(zhǔn)飼料，銀杏葉片25mg/kg﹒bw灌胃，6d/周）、銀杏葉片拮抗砷中毒組（簡稱銀杏抗砷組，喂飼含砷量為100mg/kg的飼料，同時(shí)銀杏葉片25mg/kg﹒bw灌胃，6d/周）

3、，喂養(yǎng)3個(gè)月。3、銀杏葉片治療砷中毒大鼠腎損傷實(shí)驗(yàn)研究：分為3組，包括正常對(duì)照B組（喂飼標(biāo)準(zhǔn)飼料，喂養(yǎng)4.5個(gè)月）、砷中毒B組（喂飼含砷量為100mg/kg的飼料3個(gè)月后，再喂飼標(biāo)準(zhǔn)飼料1.5個(gè)月）、銀杏葉片治療砷中毒組（簡稱銀杏治療組，喂飼含砷量為100mg/kg的飼料3個(gè)月后，再喂飼標(biāo)準(zhǔn)飼料1.5個(gè)月，喂飼標(biāo)準(zhǔn)飼料期間銀杏葉片25mg/kg﹒bw灌胃，6d/周）。實(shí)驗(yàn)終期采集大鼠毛發(fā)、尿液、血液和腎臟，觀察腎臟HE、Masson染色

4、后形態(tài)學(xué)改變，檢測(cè)大鼠毛發(fā)砷（HAs）、尿砷（UAs）和腎臟砷（KAs）含量，測(cè)定其腎功能指標(biāo)尿白蛋白（UALB）、尿 N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（UNAG）、尿β2-微球蛋白（Uβ2-MG）、尿素氮（BUN）、血肌酐（SCr），觀察外周血T淋巴細(xì)胞亞群CD3+、CD4+、CD8+變化情況，測(cè)定血清和腎勻漿超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）、巰基（-SH）和丙二醛（MDA）含量，檢測(cè)腎臟內(nèi)SOD、GSH-

5、Px和CD3+、CD4+、CD8+蛋白表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1、建立高砷煤烘玉米粉致大鼠砷中毒腎損傷模型：砷中、高劑量組大鼠出現(xiàn)不同程度被毛蓬松、精神萎靡等癥狀；各染砷組大鼠體重增長緩慢；光鏡下HE染色可見砷中、高劑量組大鼠腎臟有不同程度的病理改變，Masson染色見砷高劑量組有腎小管間質(zhì)纖維化；隨著染砷劑量的增加，大鼠UAs、HAs、KAs、UALB、UNAG和Uβ2-MG的水平逐漸增高（p<0.05）；大鼠UAs、

6、HAs、KAs含量升高時(shí)，UALB、UNAG、Uβ2-MG含量均升高（p<0.05）。
　　2、氧化應(yīng)激在高砷煤烘玉米粉致大鼠砷中毒腎損傷中的作用：隨染砷劑量的增加，砷中、高劑量組大鼠血清和腎勻漿中SOD、GSH-Px、-SH含量均降低，MDA含量增高（p<0.05）。大鼠KAs、Uβ2-MG升高，血清、腎勻漿MDA增多，SOD、GSH-Px和-SH均減少（p<0.05）。免疫組化結(jié)果顯示，與正常對(duì)照A組相比，腎組織SOD、GSH

7、-Px陽性表達(dá)量逐漸下降（p<0.05）。
　　3、免疫功能抑制在高砷煤烘玉米粉致大鼠砷中毒腎損傷中的作用：隨染砷劑量的增加，外周血中CD3+、CD4+陽性率及CD4+/CD8+均降低（p<0.05）。砷中、高劑量組KAs、Uβ2-MG升高，外周血CD3+、CD4+T淋巴細(xì)胞減少（p<0.05）。免疫組化結(jié)果顯示，與正常對(duì)照組相比，砷中、高劑量組腎組織CD3+、CD4+和CD8+陽性表達(dá)量升高（p<0.05）。
　　4、砷中

8、毒腎損傷大鼠體內(nèi)氧化應(yīng)激與免疫功能抑制的關(guān)系：當(dāng)外周血中CD3+、CD4+逐漸增高時(shí)，血清SOD、GSH-Px、-SH逐漸升高，MDA逐漸減少（p<0.05）；免疫組化結(jié)果顯示，腎臟免疫指標(biāo)CD8+陽性表達(dá)量增加時(shí)，腎臟抗氧化指標(biāo)SOD、GSH-Px陽性表達(dá)量降低（p<0.05）。
　　5、銀杏葉片對(duì)高砷煤烘玉米粉致大鼠腎損傷的拮抗作用：與正常對(duì)照A組、銀杏組比較，砷中毒A組、銀杏抗砷組UAs、HAs、KAs、UNAG、Uβ2-M

9、G和UALB含量均增高（p<0.05）；與砷中毒A組比較，銀杏抗砷組KAs、UNAG、Uβ2-MG和UALB含量均降低（p<0.05）。氧化損傷指標(biāo)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)：與正常對(duì)照A組比較，砷中毒A組、銀杏拮抗組腎勻漿SOD、GSH-Px和-SH含量均降低，MDA升高（p<0.05）；與砷中毒A組比較，銀杏拮抗組腎勻漿SOD、GSH-Px和-SH含量均升高，MDA降低（p<0.05）；免疫組化結(jié)果顯示，與砷中毒A組相比，銀杏抗砷組腎組織SOD、GS

10、H-Px陽性表達(dá)量升高（p<0.05）。免疫功能指標(biāo)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，與砷中毒A組比較，銀杏抗砷組外周血CD3+、CD8+、CD4+/CD8+均升高（p<0.05）；免疫組化結(jié)果顯示，與砷中毒A組相比，銀杏抗砷組腎組織CD4+、CD8+陽性表達(dá)量減少（p<0.05）。
　　6、銀杏葉片對(duì)高砷煤烘玉米粉致大鼠腎損傷的治療作用：與正常對(duì)照B組相比，砷中毒B組、銀杏治療組UAs、HAs、KAs、UALB、UNAG和Uβ2-MG含量升高（p<0.

11、05）；與砷中毒B組比較，銀杏治療組HAs、Uβ2-MG含量下降（p<0.05）。氧化損傷指標(biāo)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)：與正常對(duì)照A組比較，砷中毒B組、銀杏治療組腎勻漿SOD、GSH-Px和-SH含量均降低，MDA升高（p<0.05）；免疫組化結(jié)果顯示，與砷中毒B組相比，銀杏治療組腎組織SOD、GSH-Px陽性表達(dá)量增加（p<0.05）。免疫功能抑制指標(biāo)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，與砷中毒B組比較，銀杏抗砷組外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+升高（p<0.05

12、）。
　　結(jié)論：
　　1、成功建立高砷煤烘玉米粉致大鼠砷中毒腎損傷模型。
　　2、腎臟是砷的靶器官，砷在腎臟的蓄積是其致大鼠腎損傷的直接原因之一；監(jiān)測(cè)UAs并結(jié)合腎損傷效應(yīng)指標(biāo)UALB、UNAG、Uβ2-MG的檢測(cè)，對(duì)早期發(fā)現(xiàn)砷中毒腎損傷具有應(yīng)用價(jià)值。
　　3、氧化應(yīng)激是引起高砷煤烘玉米粉致大鼠腎損傷的直接原因之一。
　　4、機(jī)體免疫功能抑制可促進(jìn)高砷煤烘玉米粉致大鼠腎損傷；CD3+、CD4+和CD8+T淋