銀杏葉總黃酮對腎缺血再灌注損傷大鼠保護(hù)作用及其機(jī)制的研究.pdf

1、腎缺血再灌注損傷是臨床上常見的病理生理過程。在臨床上，如急性缺血性腎功衰竭、心肺復(fù)蘇、心臟體外循環(huán)、失血性休克、需暫時阻斷腎血流的手術(shù)等，均可導(dǎo)致腎缺血再灌注損傷。銀杏葉總黃酮(total flavonoid in leaves of Ginkgo biloba, TFG)為銀杏葉的提取物，其藥理作用廣泛。TFG對心臟和腦缺血再灌注均有保護(hù)作用，但目前未見TFG防治腎IRI的相關(guān)報道。
　　 第一部分、銀杏葉總黃酮對腎缺血再灌注

2、損傷大鼠的保護(hù)作用
　　 目的：研究銀杏葉總黃酮對大鼠腎臟缺血再灌注損傷的影響。
　　 方法：將50只SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組（Sham組）、缺血／再灌注組（I/R組）及TFG低、中、高劑量組（TFG-L組、TFG-M組、TFG-H組），每組10只。TFG低、中、高劑最組分別予TFG50、100和200mg/kg灌胃，每日3次，連續(xù)3d。末次給藥12h后I/R組及TFG各劑量組采用央閉雙側(cè)腎動脈45min、再灌注24h制

3、備急性腎IRI模型。采用化學(xué)方法測定各組血清肌酐(creatinine，Cr)和尿素氮(blood urea nitrogen，BUN)水平；HE染色方法光鏡下觀察腎組織病理形態(tài)學(xué)改變并采用Paller法進(jìn)行腎小管損傷評分。
　　 結(jié)果：①I/R組血Cr和BUN水平、Paller評分明顯升高，與Sham組比較有顯著差異(P＜0.01);TFG各劑量組的血Cr、BUN水平以及Paller評分均低于I/R組（P＜0.05 or P＜

4、0.01），且三個指標(biāo)與TFG劑量呈負(fù)相關(guān)（BUN:γ=-0.97，Cr:γ=-0.78，Paller評分：γ=-0.95，均P＜0.01）；②HE染色觀察腎組織形態(tài)學(xué)改變顯示I/R組有明顯的腎小管上皮細(xì)胞水腫、空泡變性、管腔擴(kuò)張、基底膜皺縮、核碎裂以及各種管型，TFG各劑量組上述病理改變明顯減輕，尤其以TFG-H組更為明顯。
　　 結(jié)論：銀杏葉總黃酮可降低大鼠腎IRI后血BUN和Cr水平，減輕腎小管損傷程度，對腎IRI具有保護(hù)

5、作用。
　　 第二部分、銀杏葉總黃酮對大鼠急性腎缺血再灌注損傷的保護(hù)機(jī)制
　　 目的：探討TFG對大鼠腎缺血再灌注損傷的作用機(jī)制并尋求治療腎缺血再灌注損傷的有效途徑。
　　 方法：采用夾閉雙側(cè)腎蒂致腎缺血45min后再灌注制作大鼠腎缺血再灌注損傷模型。將SD大鼠隨機(jī)分為三組：假手術(shù)組（Sham組）、缺血／再灌注組（I/R組）、銀杏葉總黃酮預(yù)處理組（TFG組），每組又分為10min、30min、1h和24h四個時間

6、點。測定血清Cr和BUN水平評價腎功能，TUNEL法檢測腎小管上皮細(xì)胞凋亡，免疫印跡方法檢測腎組織中JNK和p38MAPK的表達(dá)和磷酸化水平。
　　 結(jié)果：①I/R組血Cr和BUN水平明顯升高，與Sham組比較有顯著差異(均P＜0.01);TFG組血Cr和BUN水平明顯低于I/R組（均P＜0.01）；②I/R組腎組織細(xì)胞凋亡指數(shù)顯著升高(P＜0.01)；TFG組比I/R組細(xì)胞凋亡指數(shù)顯著降低(P＜0.01)；③I/R組在再灌注1

7、0min時磷酸化p38MAPK蛋白表達(dá)即開始有所增加，至1h時達(dá)高峰，24h已開始回落，但仍明顯高于假手術(shù)組（P＜0.01）；TFG組各時間點均較I/R組表達(dá)減少，以30min時間點最為明顯(P＜0.01)；三組各個時間點非磷酸化p38MAPK蛋白表達(dá)無明顯差異（P＞0.05）；④I/R組從再灌注10min開始磷酸化JNK蛋白表達(dá)升高，30min達(dá)最高峰，1h和24h均有所下降但仍明顯高于Sham組(P＜0.01);TFG組各時間點均較