短暫反復(fù)缺血預(yù)處理對(duì)大鼠腎缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的:腎缺血再灌注損傷(renal ischemia/reperfusion injury,RI/RI)是臨床上常見的病理生理現(xiàn)象,在缺血性急性腎損傷的病理過程中起重要作用,是多因素參與的復(fù)雜病理過程。缺血預(yù)處理(ischemicpreconditioning,IPC)指組織器官遭受反復(fù)短暫缺血后,可在后續(xù)的長(zhǎng)期缺血中得到保護(hù),使缺血損傷減輕。研究發(fā)現(xiàn),IPC對(duì)心、肝和小腸等許多器官均具有保護(hù)作用,但其作用機(jī)制尚未完全闡明。短暫反復(fù)IP

2、C是否對(duì)RI/RI具有保護(hù)作用,目前少有報(bào)道。因此,探討短暫反復(fù)IPC對(duì)RI/RI的保護(hù)作用及其機(jī)制,對(duì)RI/RI的防治具有十分重要的意義。本實(shí)驗(yàn)旨在應(yīng)用生理,生化,放射免疫及免疫組化等方法觀察短暫反復(fù)IPC對(duì)RI/RI的作用,并探討其可能的作用機(jī)制。
　　 方法:成年健康雄性SD大鼠40只,體重150-180g,在18-22°度實(shí)驗(yàn)室安靜飼養(yǎng)兩日后動(dòng)物隨機(jī)分為5組,即:
　　 1、假手術(shù)組(Sham)
　　 2

3、、缺血再灌注組(I/R)
　　 3、五分鐘缺血預(yù)處理一次+缺血再灌注(1+I/R)
　　 4、五分鐘缺血預(yù)處理二次+缺血再灌注(2+I/R)
　　 5、五分鐘缺血預(yù)處理三次+缺血再灌注(3+I/R)
　　 各組動(dòng)物經(jīng)1％戊巴妥鈉腹腔麻醉,開腹,暴露雙側(cè)腎動(dòng)、靜脈。假手術(shù)組,只開腹不夾閉雙側(cè)腎動(dòng)、靜脈;I/R組,夾閉雙側(cè)腎動(dòng)、靜脈45min松夾再灌;1+I/R、2+I/R和3+I/R各組則分別夾閉雙側(cè)腎動(dòng)、

4、靜脈五分鐘再灌五分鐘一次,兩次和三次(IPC)后再行夾閉雙側(cè)腎動(dòng)、靜脈45 min,松夾再灌后,逐層縫合腹膜,腹壁肌肉和皮膚。24小時(shí)后取血及雙側(cè)腎臟測(cè)定血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、腎組織丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(iNOS)、超氧化物歧化酶(SOD)、內(nèi)皮素(ET)以及腎組織HO-1的表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 1、大鼠RI/RI后,光鏡所見:Sham組腎組織無明顯異常;I/R組腎組織損

5、傷加重,表現(xiàn)為腎小管上皮細(xì)胞渾濁腫脹、壞死、管腔擴(kuò)張,間質(zhì)變寬、水腫、有大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)。1+I/R組、2+I/R和3+I/R各組腎小管損傷程度均較I/R組明顯減輕,間質(zhì)炎細(xì)胞明顯減少,水腫明顯減輕。其中以3+I/R組損傷程度減輕的最為顯著。
　　 2、大鼠RI/RI后,I/R組腎功能明顯下降,BUN和Scr均明顯高于Sham(P＜0.01);與I/R組相比,1+I/R、2+I/R和3+I/R各組BUN和Scr均明顯降低(P＜0.

6、05～0.01),其中以3+I/R組降低程度最為顯著。
　　 3、大鼠RI/RI后,I/R組MDA含量較Sham組顯著升高;SOD活力則較Sham組明顯降低(P＜0.01);與I/R組相比,1+I/R、2+I/R和3+I/R各組SOD活力均明顯增加,而MDA含量則明顯降低(P＜0.05～0.01),其中以3+I/R組MDA含量降低的最為顯著。
　　 4、大鼠RI/RI后,FR組NO和iNOS含量均明顯高于Sham組(P＜

7、0.01);與I/R組相比,I+I/R、2+I/R和3+I/R各組NO含量均明顯增加(P＜0.05～0.01),而iNOS含量則明顯降低(P＜0.05～0.01)。
　　 5、大鼠RI/RI后,I/R組ET含量明顯高于Sham組(P＜0.01);與I/R組相比,1+I/R、2+I/R和3+I/R各組ET含量則顯著減低(P＜0.05～0.01),其中以3+I/R組降低的最為顯著。
　　 6、大鼠RI/RI后,腎組織HO-1

8、免疫組化顯示:Sham組腎小管上皮細(xì)胞內(nèi)HO-1表達(dá)不明顯,I/R組腎小管上皮細(xì)胞內(nèi)HO-1表達(dá)較Sham組明顯增加,與I/R組相比,1+I/R、2+I/R和3+I/R各組腎小管上皮細(xì)胞內(nèi)HO-1表達(dá)均明顯增加,其中以3+I/R組HO-1表達(dá)增加的最為明顯。
　　 結(jié)論:
　　 1、RI/RI后,腎功能和腎小管上皮細(xì)胞明顯受損。RI/RI大鼠BUN、Scr、MDA、iNOS含量均較Sham組明顯增加,SOD活力則較Sha

9、m組明顯降低,腎組織ET含量明顯增加,腎小管上皮細(xì)胞內(nèi)HO-1免疫反應(yīng)陽性顆粒表達(dá)增加。
　　 2、短暫反復(fù)IPC可顯著減輕RI/RI大鼠腎組織損傷,降低BUN、Scr和MDA含量,增加腎組織SOD活力。表明短暫反復(fù)IPC可以減輕RI/RI大鼠腎組織損傷,改善腎功能。
　　 3、短暫反復(fù)IPC能明顯降低腎組織iNOS含量,增加NO含量,降低腎組織ET含量,增加腎小管上皮細(xì)胞內(nèi)HO-1免疫反應(yīng)陽性顆粒的表達(dá)。表明短暫反復(fù)I