大鼠發(fā)育期根端復合體的組織學研究.pdf

1、目的：
　　本實驗旨在通過對正常發(fā)育情況下SD大鼠牙根的組織學形態(tài)結構進行觀察，了解 SD大鼠牙根發(fā)育過程的各個階段發(fā)育期根端復合體的組織學狀態(tài)，確定 SD大鼠牙根發(fā)育過程的組織學時序性，探究發(fā)育期根端復合體與牙根發(fā)育過程的各階段組織學變化之間的關系。
　　方法：
　　不同性別的SD大鼠都將被使用，我們將出生當天設計為“0”天。分別選取出生后3、5、7、9、11、13、17、21、25天的SD大鼠，用頸部脫臼的方式處死

2、 SD大鼠，75％乙醇浸泡5min，將 SD大鼠固定于超凈工作臺上。用眼科剪沿 SD大鼠口角處切斷上下頜骨，完整分離SD大鼠下頜骨，去除舌體及周圍多余組織。
　　一、HE染色：
　　將下頜骨組織放置于4%的多聚甲醛中固定過夜，10%的EDTA-2Na脫鈣2周，梯級乙醇脫水，二甲苯透明石蠟包埋，沿下頜第一磨牙近遠中方向做連續(xù)5μm切片，切片行 HE染色，光學顯微鏡下觀察其組織學結構。
　　二、免疫組織化學染色
　　

3、切片常規(guī)脫蠟至水，緩沖液洗3min/2次。將切片放于Hydrogen Peroxide Block中孵育10-15分鐘，PBS緩沖液洗5min/2次，滴加Ultra v block，室溫下孵育5min，緩沖液沖洗5min/2次，滴加兔抗鼠CK14抗體37℃孵育2小時，緩沖液洗5min/2次，滴加增強子，室溫下孵育20分鐘，緩沖液洗5min/2次，向1ml DAB Plus Substrate中滴加1-2滴DAB Plus Chromog

4、en,混勻后滴加到切片上,孵育15分鐘，自來水反復沖洗,復染,脫水,透明,封片。兔抗鼠CK14抗體由Abclonal公司提供。
　　結果：
　　出生后3d，SD大鼠下頜第一磨牙牙冠尚未完全形成，冠邊緣處尚無硬組織形成，成釉器在牙頸部縮窄，尚未觀察到HERS結構形成。出生后5d，牙冠繼續(xù)發(fā)育，頸部縮窄，尚未觀察到明顯的HERS結構出現(xiàn)。出生后7d，牙冠形態(tài)已經(jīng)基本形成，牙頸部縮窄，內(nèi)釉上皮細胞和外釉上皮細胞在牙頸部增值，此時可

5、以觀察到明顯的赫特維希上皮根鞘（HERS）結構形成,HERS向內(nèi)彎曲，并向根尖方向延長，HERS結構將牙囊和牙乳頭這兩種間充質(zhì)組織分隔開來。出生后9d，牙冠形態(tài)已經(jīng)完全形成，冠部牙釉質(zhì)及牙本質(zhì)厚度持續(xù)增加，免疫組織化學染色提示 HERS繼續(xù)向未來根尖孔方向延伸，HERS保持完整性，牙冠邊緣尚未見根部牙本質(zhì)及牙骨質(zhì)形成。出生后11d，在牙冠邊緣可以看到根部牙本質(zhì)形成，HERS依然保持它的基本長度及完整性，但根部牙本質(zhì)表面尚未見明顯牙骨質(zhì)形

6、成。出生后13天,HERS依然保持其基本長度，但部分 HERS已發(fā)生斷裂，根部牙本質(zhì)的表面可見少許牙骨質(zhì)形成，根尖方向的細胞相對于冠部牙髓更為密集。出生后17天，HERS繼續(xù)發(fā)生斷裂，根部牙本質(zhì)已經(jīng)到達接近一半左右的牙根全長，并持續(xù)增厚，無細胞牙骨質(zhì)形成于根部牙本質(zhì)表面，根尖孔尚未閉合。出生后21d，牙齒初萌，根部牙本質(zhì)持續(xù)增厚，牙根也繼續(xù)延長，HERS已經(jīng)發(fā)生斷裂，僅有在根尖處保留部分完整HERS.出生后25d，牙冠已明顯萌出，牙根繼

7、續(xù)延伸，根尖孔仍未完全封閉，成牙本質(zhì)細胞呈柱狀，根部牙本質(zhì)表面可以觀察到細胞牙骨質(zhì)和無細胞牙骨質(zhì)形成，HERS已完全斷裂，根尖處細胞濃聚，反應根尖處細胞的高活性狀態(tài)。
　　結論：
　　1.本實驗系統(tǒng)性的對正常大鼠牙根發(fā)育狀態(tài)下發(fā)育期根端復合體的組織形態(tài)學變化進行觀察，明確了大鼠牙根發(fā)育的組織學時序特點，初步確定了發(fā)育期根端復合體與牙根發(fā)育的各階段組織學變化之間的關系。
　　2.大鼠牙根的組織形態(tài)與人牙根組織形態(tài)在一定程