溫潤通絡(luò)方對糖尿病模型大鼠周圍神經(jīng)保護作用的實驗研究.pdf

1、目的：通過觀察模型大鼠坐骨神經(jīng)及其周圍組織中血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）、堿性成纖維生長因子（bFGF）、神經(jīng)生長因子（NGF）的表達(dá)，和溫潤通絡(luò)方對其影響，探討糖尿病周圍神經(jīng)病變（DPN）的發(fā)生機理和溫潤通絡(luò)方對周圍神經(jīng)的保護作用，為溫潤通絡(luò)方的臨床應(yīng)用提供依據(jù)。豐富和發(fā)展中醫(yī)病因病機學(xué)和治療學(xué)理論。
　　 方法：選用SD雄性大鼠70只，體重200～220g。大鼠自由飲水進(jìn)食，飼養(yǎng)于普通動物實驗室內(nèi)。動物適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，將60

2、只大鼠禁食12小時后，按50mg/kg一次性腹腔注射1％鏈脲佐菌素檸檬酸鈉-檸檬酸緩沖液（檸檬酸鈉-檸檬酸緩沖液為0.1mmol/L，pH值4.2～4.5），72小時后，尾尖取血測定血糖值，凡血糖值大于16.7mmol/L者納入實驗。將造模成功大鼠隨機分為5組：模型對照組（簡稱模型組）、溫潤通絡(luò)方高劑量組（簡稱高劑量組）、溫潤通絡(luò)方低劑量組（簡稱低劑量組）、血府逐瘀對照組（簡稱血府組）、彌可保對照組（簡稱彌可保組）。另設(shè)正常組大鼠10只

3、，腹腔注射等體積的檸檬酸鈉-檸檬酸緩沖液。溫潤通絡(luò)方低劑量組大鼠中藥量按17g/kg·d（為60kg成人臨床用藥的10倍）；溫潤通絡(luò)方高劑量組大鼠中藥量按34g/kg·d（為60kg成人臨床用藥的20倍）；血府逐瘀湯組大鼠中藥量按12.8g/kg·d（為60kg成人臨床用藥的10倍）；彌可保組大鼠用藥量按250μg/kg·d（為60kg成人臨床用藥的10倍），每天上午灌胃1次，每次用藥體積均按1ml/100g計算。正常組與模型組每天上午

4、1次灌服等體積生理鹽水。觀察記錄大鼠的一般情況，包括毛色、神態(tài)、體重、攝食、飲水、尿量、行為活動等。灌胃8周后，于最后1次給藥后禁食12小時斷頭取血，離心，分離血清，用葡葡糖氧化酶法測定血糖。剖取坐骨神經(jīng)及其周圍肌肉組織（大小約0.5cm×0.5cm×0.5cm）于4％多聚甲醛中固定，HE染色，光鏡下觀察坐骨神經(jīng)組織形態(tài)變化。同時運用免疫組化法觀察坐骨神經(jīng)及其周圍肌肉組織中VEGF、bFGF、NGF的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：

5、r>　　 1一般情況
　　 造模前各組動物反應(yīng)靈敏，毛發(fā)光滑，毛色正常，飲食正常，行動敏捷。STZ注射造模3天后，開始出現(xiàn)多尿、多飲、多食癥狀，并逐漸出現(xiàn)體重減輕、精神萎靡、體毛枯黃、稀疏，大便不成形，行動遲緩，反應(yīng)遲鈍等癥狀，整體狀態(tài)差。連續(xù)給藥8周后，正常組大鼠表現(xiàn)為精神狀態(tài)良好、體重增加、動作自如、毛色白且光潔、無明顯煩躁易驚、體重增長、攝食、飲水及活動均正常。模型組大鼠表現(xiàn)出飲水量、尿量、攝食明顯增加，“三多一少”癥狀

6、典型，毛色枯黃、蓬松、煩躁易驚、體重顯著減輕。血府逐瘀湯組和彌可保組大鼠同樣表現(xiàn)出飲水量、尿量、攝食明顯增加，毛色枯黃、蓬松、煩躁易驚、體重減輕。溫潤通絡(luò)高、低劑量組大鼠多飲、多食、多尿癥狀逐漸減輕，體重增加，體毛光潔，大便成形，自主活動增加。溫潤通絡(luò)方高劑量組大鼠多飲、多食、多尿癥狀減輕程度，體重增加程度等優(yōu)于溫潤通絡(luò)方低劑量組。
　　 2體重變化
　　 模型組大鼠與正常組相比體重明顯下降（P<0.01）；溫潤通絡(luò)方高

7、、低劑量組、血府逐瘀湯組和彌可保組大鼠體重皆有不同程度升高，與模型組大鼠比較皆有顯著性差異（均P<0.01）；溫潤通絡(luò)方高劑量組體重增加顯著，與溫潤通絡(luò)方低劑量組、血府逐瘀湯組和彌可保組比較皆有明顯差別（均P<0.01）；溫潤通絡(luò)方低劑量組雖有體重增加，但與血府逐瘀湯組和彌可保組比較均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。
　　 3血糖變化
　　 模型組大鼠血糖與正常組相比具有明顯差別（P<0.01）；溫潤通絡(luò)方高、低劑量組血糖

8、水平與模型組比較皆有顯著差別（均P<0.01）；血府逐瘀湯組和彌可保組與模型組比較皆無顯著差別（均P>0.05）；溫潤通絡(luò)方高劑量組與溫潤通絡(luò)方低劑量組、血府逐瘀湯組和彌可保組比較皆有顯著差別（均P<0.01）；溫潤通絡(luò)方低劑量組與血府逐瘀湯組和彌可保組比較皆有顯著差別（均P<0.01）。
　　 4坐骨神經(jīng)組織形態(tài)學(xué)改變
　　 正常組大鼠坐骨神經(jīng)表現(xiàn)為有髓神經(jīng)纖維排列緊密，髓鞘組織正常，雪旺氏細(xì)胞散在髓鞘邊緣，髓鞘內(nèi)軸突

9、清晰可見。模型組大鼠坐骨神經(jīng)表現(xiàn)為神經(jīng)纖維腫脹，鞘細(xì)胞減少，神經(jīng)外膜毛細(xì)血管擴張充血，炎細(xì)胞浸潤，部分軸突消失。彌可保組大鼠坐骨神經(jīng)出現(xiàn)部分神經(jīng)纖維腫脹，鞘細(xì)胞數(shù)目減少，大部分髓鞘溶解。溫潤通絡(luò)方低劑量組、血府逐瘀湯組坐骨神經(jīng)表現(xiàn)為神經(jīng)纖維腫脹，軸突消失。溫潤通絡(luò)方高劑量組坐骨神經(jīng)表現(xiàn)為神經(jīng)中可見到少數(shù)正常髓鞘，鞘細(xì)胞數(shù)目增多，髓鞘中可見正常軸突。
　　 5坐骨神經(jīng)及其周圍組織中VEGF、bFGF、NGF表達(dá)
　　 模型

10、組大鼠坐骨神經(jīng)中VEGF、bFGF、NGF表達(dá)的平均灰度皆明顯高于正常組（均P<0.01）；經(jīng)用藥治療后，溫潤通絡(luò)方高、低劑量組、血府逐瘀湯組和彌可保組大鼠坐骨神經(jīng)中VEGF、bFGF、NGF表達(dá)的平均灰度均低于模型組（均P<0.01），溫潤通絡(luò)方高、低劑量組、血府逐瘀湯組和彌可保組大鼠坐骨神經(jīng)周圍組織中VEGF、bFGF、NGF表達(dá)的平均灰度均低于模型組（均P<0.01）。其中，溫潤通絡(luò)方低劑量組大鼠坐骨神經(jīng)中VEGF、bFGF、NG

11、F表達(dá)的平均灰度與血府逐瘀湯組比較，皆無統(tǒng)計學(xué)意義（均P>0.05）；溫潤通絡(luò)方低劑量組大鼠坐骨神經(jīng)中VEGF、bFGF、NGF表達(dá)的平均灰度皆高于彌可保組（均P<0.05）；溫潤通絡(luò)方高劑量組大鼠坐骨神經(jīng)中VEGF、bFGF、NGF表達(dá)的平均灰度皆低于血府逐瘀湯組、溫潤通絡(luò)方低劑量組（均P<0.01）；溫潤通絡(luò)方高劑量組大鼠坐骨神經(jīng)中VEGF、bFGF、NGF表達(dá)的平均灰度與彌可保組比較，皆無統(tǒng)計學(xué)意義（均P>0.05）。
　　

12、 模型組大鼠坐骨神經(jīng)周圍肌肉組織中VEGF、bFGF表達(dá)的平均灰度皆明顯高于正常組（均P<0.01）；模型組大鼠坐骨神經(jīng)周圍肌肉組織中NGF表達(dá)的平均灰度高于正常組（P<0.05）。經(jīng)用藥治療后，溫潤通絡(luò)方高、低劑量組、血府逐瘀湯組和彌可保組大鼠坐骨神經(jīng)周圍組織中VEGF、bFGF、NGF表達(dá)的平均灰度均低于模型組（均P<0.01）。其中，溫潤通絡(luò)方低劑量組大鼠坐骨神經(jīng)周圍肌肉組織中VEGF、bFGF、NGF表達(dá)的平均灰度與血府逐瘀湯

13、組比較，皆無統(tǒng)計學(xué)意義（均P>0.05）；溫潤通絡(luò)方低劑量組大鼠坐骨神經(jīng)周圍肌肉組織中VEGF、bFGF、NGF表達(dá)的平均灰度皆高于彌可保組（均P<0.05）；溫潤通絡(luò)方高劑量組大鼠坐骨神經(jīng)周圍肌肉組織中VEGF、NGF表達(dá)的平均灰度皆低于血府逐瘀湯組、溫潤通絡(luò)方低劑量組（均P<0.01）；溫潤通絡(luò)方高劑量組大鼠坐骨神經(jīng)周圍肌肉組織中bFGF表達(dá)的平均灰度低于血府逐瘀湯組、溫潤通絡(luò)方低劑量組（均P<0.05）；溫潤通絡(luò)方高劑量組大鼠坐骨