耐力運(yùn)動(dòng)誘導(dǎo)大鼠腎上腺髓質(zhì)細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化對(duì)EIB的影響.pdf

1、目的：初步闡明耐力運(yùn)動(dòng)在大鼠運(yùn)動(dòng)性支氣管痙攣發(fā)病過程中對(duì)腎上腺髓質(zhì)嗜鉻細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的影響及其作用機(jī)制。
　　方法：對(duì)大鼠進(jìn)行中強(qiáng)度或高強(qiáng)度跑臺(tái)耐力運(yùn)動(dòng)，并分別予NGF抗體、力竭運(yùn)動(dòng)或卵清蛋白（ovalbumin，OVA）致敏、激發(fā)干預(yù)，120只雄性Sprague-Dawley大鼠隨機(jī)分為15組，每組8只，分別為:正常對(duì)照組，力竭運(yùn)動(dòng)組，中速訓(xùn)練組，中速訓(xùn)練+ NGF抗體組，中速訓(xùn)練+力竭運(yùn)動(dòng)組，中速訓(xùn)練+ NGF抗體+力竭運(yùn)動(dòng)組

2、，高速訓(xùn)練組，高速訓(xùn)練+NGF抗體組，高速訓(xùn)練+力竭運(yùn)動(dòng)組，高速訓(xùn)練+ NGF抗體+力竭運(yùn)動(dòng)組，OVA組，OVA+中速訓(xùn)練組，OVA+中速訓(xùn)練+NGF抗體組，OVA+高速訓(xùn)練組，OVA+高速訓(xùn)練+NGF抗體組。檢測(cè)大鼠氣道阻力以及支氣管肺泡灌洗液中白細(xì)胞比例;ELISA檢測(cè)大鼠血清中腎上腺素(Epinephrine，EPI)、神經(jīng)生長(zhǎng)因子(Nerve growth factor，NGF)、皮質(zhì)酮(Corticosterone，CORT)

3、水平;光鏡觀察大鼠支氣管肺組織以及腎上腺髓質(zhì)的形態(tài)學(xué)改變;電鏡觀察大鼠腎上腺髓質(zhì)嗜鉻細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu);免疫組化法檢測(cè)腎上腺髓質(zhì)中苯乙醇胺-N-甲基轉(zhuǎn)移酶(PhenylethanolamineN-methyl transferase，PNMT)、外周蛋白(Peripherin)的表達(dá);Western blot法檢測(cè)p-ERK/ERK、p-p38/p38，p-JNK/JNK以及peripherin蛋白表達(dá)量;Real-time PCR以及we

4、stern blot法分別檢測(cè)JMJD3以及Mash1的mRNA和蛋白表達(dá)量。
　　結(jié)果：⑴與正常組以及中速訓(xùn)練組比，高速訓(xùn)練組大鼠氣道內(nèi)淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)明顯增加，氣道阻力升高;大鼠腎上腺髓質(zhì)嗜鉻細(xì)胞出現(xiàn)空泡樣變性，嗜鉻顆粒減少，出現(xiàn)細(xì)胞突起。高速訓(xùn)練組大鼠血清中NGF水平升高，EPI水平下降，腎上腺中PNMT表達(dá)下降，peripherin表達(dá)上升，同時(shí)p-ERK/ERK、JMJD3、Mash1表達(dá)均升高;NGF抗體干預(yù)能抑制高強(qiáng)度耐

5、力運(yùn)動(dòng)所致的上述病理生理改變。⑵與正常組對(duì)比，力竭運(yùn)動(dòng)組大鼠氣道阻力增高，腎上腺髓質(zhì)中血竇擴(kuò)張，其血清中EPI、CORT水平升高，腎上腺中PNMT、p-ERK表達(dá)增高，而血清中NGF、腎上腺中JMJD3及Mash1表達(dá)無明顯差異。與高速訓(xùn)練組比較，高速訓(xùn)練+力竭運(yùn)動(dòng)組大鼠氣道淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)增加，氣道阻力升高，腎上腺中peripherin、p-ERK、JMJD3、Mash1的表達(dá)均升高。但血清中EPI、CORT、NGF水平均無明顯改變。經(jīng)N

6、GF抗體干預(yù)后，高速訓(xùn)練+ NGF抗體+力竭運(yùn)動(dòng)組大鼠上述病理生理改變均明顯改善。⑶與正常組以及高速訓(xùn)練組比較，OVA組大鼠氣道中淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞增多，氣道阻力明顯升高，血清中NGF水平升高，CORT水平下降。與正常對(duì)照組比較，OVA組大鼠腎上腺髓質(zhì)嗜鉻顆粒減少，有細(xì)胞突起形成，血清EPI水平下降，大鼠腎上腺中PNMT表達(dá)下降，peripherin表達(dá)上升，同時(shí)p-ERK/ERK、JMJD3、Mash1表達(dá)均

7、升高。與OVA組對(duì)比，OVA+高速訓(xùn)練組大鼠上述病理生理改變進(jìn)一步加重，嗜鉻細(xì)胞出現(xiàn)脫顆粒改變，纖維組織增多。而經(jīng)過NGF抗體以及中強(qiáng)度耐力運(yùn)動(dòng)干預(yù)，OVA+高速訓(xùn)練+NGF抗體組以及OVA+中速訓(xùn)練組大鼠的病理生理改變可部分逆轉(zhuǎn)。
　　結(jié)論：①高強(qiáng)度耐力運(yùn)動(dòng)能夠引起大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化，其發(fā)生機(jī)制與NGF介導(dǎo)的p-ERK-JMJD3-Mash1通路活化密切關(guān)聯(lián);②劇烈運(yùn)動(dòng)激發(fā)能夠引起高強(qiáng)度耐力運(yùn)動(dòng)大鼠支氣管痙攣，