耐力運動誘導大鼠腎上腺髓質(zhì)細胞表型轉(zhuǎn)化對EIB的影響.pdf

1、目的：初步闡明耐力運動在大鼠運動性支氣管痙攣發(fā)病過程中對腎上腺髓質(zhì)嗜鉻細胞結(jié)構(gòu)和功能的影響及其作用機制。
　　方法：對大鼠進行中強度或高強度跑臺耐力運動，并分別予NGF抗體、力竭運動或卵清蛋白（ovalbumin，OVA）致敏、激發(fā)干預，120只雄性Sprague-Dawley大鼠隨機分為15組，每組8只，分別為:正常對照組，力竭運動組，中速訓練組，中速訓練+ NGF抗體組，中速訓練+力竭運動組，中速訓練+ NGF抗體+力竭運動組

2、，高速訓練組，高速訓練+NGF抗體組，高速訓練+力竭運動組，高速訓練+ NGF抗體+力竭運動組，OVA組，OVA+中速訓練組，OVA+中速訓練+NGF抗體組，OVA+高速訓練組，OVA+高速訓練+NGF抗體組。檢測大鼠氣道阻力以及支氣管肺泡灌洗液中白細胞比例;ELISA檢測大鼠血清中腎上腺素(Epinephrine，EPI)、神經(jīng)生長因子(Nerve growth factor，NGF)、皮質(zhì)酮(Corticosterone，CORT)

3、水平;光鏡觀察大鼠支氣管肺組織以及腎上腺髓質(zhì)的形態(tài)學改變;電鏡觀察大鼠腎上腺髓質(zhì)嗜鉻細胞的超微結(jié)構(gòu);免疫組化法檢測腎上腺髓質(zhì)中苯乙醇胺-N-甲基轉(zhuǎn)移酶(PhenylethanolamineN-methyl transferase，PNMT)、外周蛋白(Peripherin)的表達;Western blot法檢測p-ERK/ERK、p-p38/p38，p-JNK/JNK以及peripherin蛋白表達量;Real-time PCR以及we

4、stern blot法分別檢測JMJD3以及Mash1的mRNA和蛋白表達量。
　　結(jié)果：⑴與正常組以及中速訓練組比，高速訓練組大鼠氣道內(nèi)淋巴細胞浸潤明顯增加，氣道阻力升高;大鼠腎上腺髓質(zhì)嗜鉻細胞出現(xiàn)空泡樣變性，嗜鉻顆粒減少，出現(xiàn)細胞突起。高速訓練組大鼠血清中NGF水平升高，EPI水平下降，腎上腺中PNMT表達下降，peripherin表達上升，同時p-ERK/ERK、JMJD3、Mash1表達均升高;NGF抗體干預能抑制高強度耐

5、力運動所致的上述病理生理改變。⑵與正常組對比，力竭運動組大鼠氣道阻力增高，腎上腺髓質(zhì)中血竇擴張，其血清中EPI、CORT水平升高，腎上腺中PNMT、p-ERK表達增高，而血清中NGF、腎上腺中JMJD3及Mash1表達無明顯差異。與高速訓練組比較，高速訓練+力竭運動組大鼠氣道淋巴細胞浸潤增加，氣道阻力升高，腎上腺中peripherin、p-ERK、JMJD3、Mash1的表達均升高。但血清中EPI、CORT、NGF水平均無明顯改變。經(jīng)N

6、GF抗體干預后，高速訓練+ NGF抗體+力竭運動組大鼠上述病理生理改變均明顯改善。⑶與正常組以及高速訓練組比較，OVA組大鼠氣道中淋巴細胞、巨噬細胞、嗜酸性粒細胞、中性粒細胞增多，氣道阻力明顯升高，血清中NGF水平升高，CORT水平下降。與正常對照組比較，OVA組大鼠腎上腺髓質(zhì)嗜鉻顆粒減少，有細胞突起形成，血清EPI水平下降，大鼠腎上腺中PNMT表達下降，peripherin表達上升，同時p-ERK/ERK、JMJD3、Mash1表達均

7、升高。與OVA組對比，OVA+高速訓練組大鼠上述病理生理改變進一步加重，嗜鉻細胞出現(xiàn)脫顆粒改變，纖維組織增多。而經(jīng)過NGF抗體以及中強度耐力運動干預，OVA+高速訓練+NGF抗體組以及OVA+中速訓練組大鼠的病理生理改變可部分逆轉(zhuǎn)。
　　結(jié)論：①高強度耐力運動能夠引起大鼠腎上腺嗜鉻細胞向神經(jīng)細胞表型轉(zhuǎn)化，其發(fā)生機制與NGF介導的p-ERK-JMJD3-Mash1通路活化密切關聯(lián);②劇烈運動激發(fā)能夠引起高強度耐力運動大鼠支氣管痙攣，