硫化氫對(duì)大鼠腎上腺髓質(zhì)嗜鉻細(xì)胞分泌兒茶酚胺的影響及其機(jī)制研究.pdf

1、研究背景:
　　 硫化氫(H2S)是一種具有臭雞蛋氣味的有毒氣體。近年的研究表明，在人體內(nèi)，硫化氫(H2S)是一種重要的氣體信號(hào)分子，其通過(guò)作用于不同細(xì)胞的離子通道和受體在哺乳動(dòng)物組織中發(fā)揮著重要的生理的調(diào)節(jié)功能，并且具有治療心血管、神經(jīng)、生殖和消化等方面疾病的潛在價(jià)值。人體內(nèi)的L-半胱氨酸，可在胱硫醚β-合成酶(cystathionineβ-synthase，CBS)和胱硫醚γ-裂解酶（cystathionineγ-lyase

2、，CSE）作用下合成硫化氫。據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，大鼠腎上腺髓質(zhì)嗜鉻細(xì)胞(adrenalchromaffincells，AMCs)含有CSE。腎上腺髓質(zhì)AMCs通過(guò)釋放兒茶酚胺(catecholamine，CA)在應(yīng)激反應(yīng)的調(diào)節(jié)中發(fā)揮了關(guān)鍵作用。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道缺氧可以導(dǎo)致CSE-/-型乳鼠AMCs的兒茶酚胺分泌減少。目前，對(duì)于外源性H2S能否誘導(dǎo)AMCs釋放CA及其離子機(jī)制尚無(wú)報(bào)道。在本研究中，我們使用安培法和全細(xì)胞膜片鉗記錄法探討外源性硫化氫能

3、否誘發(fā)AMCs釋放CA及其離子機(jī)制。
　　 材料和方法:
　　 實(shí)驗(yàn)選用健康雌性Wistar大鼠(200～250g)，自由飲食。實(shí)驗(yàn)前麻醉Wistar大鼠，取出腎上腺置于D-Hanks液中，剪除皮質(zhì)，將每個(gè)髓質(zhì)均分成兩個(gè)，置于0.5ml混合酶液中(膠原酶I3mg/ml、透明質(zhì)酸酶2.4mg/ml、DNase0.5mg/ml、BSA2.6mg/ml)37℃恒溫孵育70分鐘，吸出酶液加入1mlD-Hanks液沖洗組織塊，再用

4、巴斯德管吹打組織塊，顯微鏡下觀察到細(xì)胞后停止吹打，將細(xì)胞固定于蓋玻片（用PLL處理過(guò)）上然后加入DMEM培養(yǎng)基（含10％的FBS），37℃恒溫CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)。將固定有細(xì)胞的蓋玻片放入記錄腔室中，并用細(xì)胞外液持續(xù)灌流，速度為1ml/min。使用5微米的碳纖維電極檢測(cè)兒茶酚胺的釋放。全細(xì)胞記錄法檢測(cè)嗜鉻細(xì)胞的電流變化。
　　 所有數(shù)據(jù)均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤表示，采用單因素方差分析比較多組間的差異，t檢驗(yàn)比較兩組間的差異，以P

5、＜0.05為顯著性差異界值。
　　 結(jié)果:
　　 標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞外液中加入外源性的硫氫化鈉（H2S供體）可以誘發(fā)AMCs釋放CA。實(shí)驗(yàn)中使用70mMKCl作為陽(yáng)性對(duì)照，細(xì)胞外液作為陰性對(duì)照。780mV電壓時(shí)可以觀察到碳纖維電極氧化CA產(chǎn)生的尖峰，切換到0mV時(shí)尖峰消失。將標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞外液換成無(wú)鈣的細(xì)胞外液，硫氫化鈉不能誘發(fā)AMCs釋放CA。綜上所述，H2S可以誘導(dǎo)AMCs釋放CA。
　　 同時(shí)使用安培記錄法和全細(xì)胞記錄法檢