補陽還五湯對小鼠實驗性腦出血后金屬基質蛋白酶遠期表達的影響.pdf

1、背景和目的:腦出血(Intracerebral hemorrhage，ICH)是指非外傷性腦實質內的出血。發(fā)病率為60～80/10萬人口/年，在我國占急性腦血管病的30％左右。急性期病死率約為30％～40％，是急性腦血管病中最高的。腦出血的治療主要是對有指征者應及時清除血腫、積極降低顱內壓、保護血腫周圍腦組織。腦出血屬中醫(yī)學“中風”的范疇。清代著名醫(yī)家王清任指出“無氣則不能動，不能動，名曰半身不遂”，氣為血帥，氣虛則行血無力，血行遲滯則

2、成淤血，氣虛失于統(tǒng)攝，血溢脈外，亦成淤血。因此，氣虛血瘀當是腦出血后各種病理生理變化的重要病機之一。益氣活血法的基礎研究，主要在選用經(jīng)典方—補陽還五湯或仿效其方義自擬方的基礎上開展，且集中于神經(jīng)元保護和神經(jīng)再生等方面。本實驗采用Ⅶ型膠原酶誘導建立小鼠腦出血模型，通過運用益氣活血法代表方劑補陽還五湯干預，觀察小鼠神經(jīng)行為學改變，采用免疫組化法檢測vWF（血管內皮細胞的標志蛋白），計數(shù)陽性微血管數(shù);采用Western Blot方法檢測金屬基

3、質蛋白酶-2(matrixmetalloprotein2，MMP2)、MMP9的蛋白表達，探討補陽還五湯是否通過調節(jié)基質金屬蛋白酶活性促進血管新生，及腦出血后期應用多西環(huán)素抑制血管新生的機制。
　　 方法:40只8周齡昆明小鼠隨機分為補陽還五湯組(BU YANGHUAN WU Decoction, BYHWD)，腦出血(Intracerebral hemorrhage,ICH)組，多西環(huán)素組(Doxcyline，DOX)，補陽還

4、五湯+多西環(huán)素(BYHWD+ DOX)4組，每組10只小鼠，再隨機抽取5只老鼠用于Western Blot（蛋白質印跡）方法，另5只用于免疫組織化學法。用Ⅶ型膠原酶腦內立體定位注入小鼠右側基底節(jié)內復制小鼠腦出血模型，術后開始觀察行為學改變，14天后斷頭取腦，采用免疫組化法檢測血管內皮細胞的標志蛋白vWF，計數(shù)陽性新生微血管數(shù)，采用WesternBlot方法檢測MMP2、MMP9的蛋白表達。
　　 結果:
　　 1.免疫組

5、化方法:ICH組陽性微血管數(shù)明顯多于DOX組(P＜0.01);BYHWD組陽性微血管數(shù)明顯多于ICH組（P＜0.01）;BYHWD組陽性微血管數(shù)明顯多于BYHWD+ DOX組（P＜0.01）。
　　 2.Western Blot方法:與ICH組比較，DOX顯著降低MMP9的表達（P＜0.01），BYHWD能顯著上調MMP2、9的表達（P＜0.01）;與BYHWD組比較，DOX能顯著抑制BYHWD對MMP2，9的上調作用。

6、　　 3.行為學:第1天、第3天兩個時間點各組小鼠在NIS(Nerve injury score，神經(jīng)損傷評分)、轉角測試、錯足測試、體重上無明顯差異。第7天，BYHWD組及BYWHD+DOX組體重明顯重于ICH組及DOX組(P＜0.05)，BYHWD組及BYWHD+DOX組神經(jīng)損傷評分(NIS)、轉角測試、錯足測試結果明顯低于ICH組及DOX組(P＜0.05);第14天，DOX組體重明顯低于ICH組及BYWHD+DOX組（P＜0.0

7、5），BYHWD組體重明顯高于ICH組及BYWHD+DOX組（P＜0.05），DOX組NIS、轉角測試、錯足測試結果明顯高于ICH組及BYWHD+DOX組(P＜0.05)，BYHWD組NIS、轉角測試、錯足測試結果明顯低于ICH組及BYWHD+DOX組(P＜0.05)。
　　 結論:
　　 1.金屬基質蛋白酶參與腦出血后血管新生的調節(jié)。
　　 2.補陽還五湯可能通過改變金屬基質蛋白酶的表達，促進腦出血后的血管新生