有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)多(OATP)在小檗堿肝臟攝取中的機(jī)制研究.pdf

1、本論文主要目的是要研究小檗堿在肝臟中的攝取機(jī)制。盡管小檗堿的藥理活性已經(jīng)被廣泛的研究，但是它的攝取轉(zhuǎn)運(yùn)的機(jī)制還沒有被完全了解。在本研究中我們發(fā)現(xiàn)小檗堿主要是通過主動運(yùn)輸?shù)姆绞竭M(jìn)入肝臟細(xì)胞:主動運(yùn)輸占到小檗堿肝臟攝取的76％，但是僅僅通過肝臟轉(zhuǎn)運(yùn)體有機(jī)陽離子(OCT)運(yùn)輸僅占55％。小檗堿在肝臟中的濃度遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于它的血藥濃度，而小檗堿在肝臟中的代謝只能部分解釋它的血藥濃度低肝臟濃度高這個現(xiàn)象，因?yàn)樾￠迚A的細(xì)胞膜滲透性很低，所以轉(zhuǎn)運(yùn)體對于小檗

2、堿肝臟攝取的貢獻(xiàn)也不能被排除。盡管小檗堿是外排轉(zhuǎn)運(yùn)體多藥耐藥蛋白(P-gp)和乳腺癌耐藥蛋白（BCRP）的底物，但是小檗堿的攝取轉(zhuǎn)運(yùn)體還沒有被完全了解。本研究證明小檗堿在大鼠原代肝細(xì)胞中的攝取能夠被利福平、環(huán)孢菌素A、甘草次酸這三種OATP抑制劑顯著的抑制，而這三個抑制劑分別抑制大鼠肝細(xì)胞中有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)多肽1a1(Oatp1a1)、有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)多肽1a4(Oatp1 a4)和有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)多肽1b2(Oatp1b2)。分別用了OCT

3、和OATP的抑制劑在大鼠和人的原代肝細(xì)胞中進(jìn)行了抑制實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示兩種不同轉(zhuǎn)運(yùn)體的抑制劑聯(lián)合使用后，與單劑量相比小檗堿攝取的抑制效果更加明顯。同時(shí)還使用了穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞株確認(rèn)小檗堿和OATP的關(guān)系，結(jié)果發(fā)現(xiàn)小檗堿在穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的OATP1B3人的胚胎腎293細(xì)胞(HEK293)中攝取量增加，而穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的OATP1B1-和NTCP-HEK293細(xì)胞中攝取量沒有變化。在大鼠離體肝灌流實(shí)驗(yàn)中，抑制劑利福平能夠有效的抑制小檗堿在肝臟中的攝取，而且肝

4、臟中小檗堿的提取率減少一倍。體內(nèi)的實(shí)驗(yàn)也表明小檗堿和OATP抑制劑或與底物共同給藥后，小檗堿的血藥濃度顯著的增加。在大鼠原代肝細(xì)胞中培養(yǎng)24小時(shí)以后，小檗堿能顯著影響攝取轉(zhuǎn)運(yùn)體Oatp1a4的mNA的表達(dá)，而其他攝取轉(zhuǎn)運(yùn)體基因表達(dá)量沒有明顯的改變，而外排轉(zhuǎn)運(yùn)體P-gp和Bcrp的mRNA都有明顯的下調(diào)。本課題首次報(bào)道OATP和OCT能共同轉(zhuǎn)運(yùn)小檗堿的肝臟攝取，而且OATP影響小檗堿在肝臟中的分布，在臨床中潛在的藥物-藥物相互作用中OAT