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1、研究目的:研究絲裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1(MKP-1)在子宮內(nèi)膜異位癥(內(nèi)異癥)發(fā)病機(jī)制中的作用。
方法:收集內(nèi)異癥患者和輸卵管性不孕患者內(nèi)膜組織(對(duì)照組),分別通過實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Real-time PCR)、蛋白免疫印跡(Western blot)以及免疫組化(IHC)等實(shí)驗(yàn)方法從基因轉(zhuǎn)錄水平(mRNA)和蛋白水平分析MKP-1在內(nèi)異癥患者異位內(nèi)膜、在位內(nèi)膜以及對(duì)照組子宮內(nèi)膜中的表達(dá)情況;分離并培養(yǎng)異位子宮內(nèi)
2、膜間質(zhì)細(xì)胞(ESCs),通過Small interfering RNA(siRNA)干擾技術(shù)沉默MKP-1,研究MKP-1對(duì)ESCs遷移、增殖的影響,分析IL-4、IL-6、COX-2以及VEGF等相關(guān)基因的表達(dá)是否因MKP-1的沉默而發(fā)生改變;分離并培養(yǎng)內(nèi)異癥患者子宮內(nèi)膜在位間質(zhì)細(xì)胞(以下簡(jiǎn)稱為EESCs),分別予以雌激素與脂氧素刺激,檢測(cè)細(xì)胞中MKP-1的表達(dá)變化,分析MKP-1是否參與雌激素和炎癥反應(yīng)對(duì)內(nèi)異癥的調(diào)控。
結(jié)
3、果:MKP-1在內(nèi)異癥以及對(duì)照組中的表達(dá):MKP-1在內(nèi)異癥患者的異位內(nèi)膜、在位內(nèi)膜以及對(duì)照組中的表達(dá)呈現(xiàn)依次遞減的趨勢(shì)。內(nèi)異癥患者的異位內(nèi)膜中表達(dá)最高,與對(duì)照組比較,差異具有極顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(*** P<0.0001),內(nèi)異癥患者的在位內(nèi)膜高于對(duì)照組正常內(nèi)膜,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(* P<0.05),但內(nèi)異癥患者自身配對(duì)的在位內(nèi)膜與異位內(nèi)膜比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.4861)。MKP-1對(duì)異位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞生物學(xué)行為的影響:(1
4、)MKP-1沉默抑制ESCs增殖。(2)MKP-1沉默促進(jìn)ESCs的遷移。同時(shí),MKP-1沉默誘導(dǎo)IL-4基因的表達(dá),其表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組(** P<0.01,)。MKP-1沉默抑制IL-6的表達(dá)、促進(jìn)了COX-2和VEGF的表達(dá),但數(shù)據(jù)沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。雌激素及脂氧素調(diào)節(jié)EESCs中MKP-1的表達(dá):(1)雌激素促進(jìn)EESCs表達(dá)MKP-1(2)脂氧素促進(jìn)EESCs表達(dá)MKP-1。
結(jié)論:臨床樣品分析表明MKP-1在內(nèi)異癥
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