拉米夫定和干擾素-γ、腫瘤壞死因子-α序貫處理抗乙型肝炎病毒作用.pdf

1、目的：研究拉米夫定和干擾素-γ(IFN-γ)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)序貫處理對HepG2.2.15細(xì)胞(HepG2.2.15cell)的抗乙型肝炎病毒(HBV)作用和細(xì)胞毒性。探討拉米夫定和干擾素-γ、腫瘤壞死因子-α序貫處理抗HBV的有效性和安全性，評估序貫治療在HBV抗病毒治療中的可行性。
　　方法：以HepG2.2.15細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)細(xì)胞，細(xì)胞分為四組：對照組、拉米夫定組、細(xì)胞因子組和序貫組。實(shí)驗(yàn)分為兩個(gè)階段：預(yù)處理階段

2、10天繼而實(shí)驗(yàn)處理階段6天。預(yù)處理階段，拉米夫定組和序貫組細(xì)胞給予含拉米夫定(2μmol/L)的細(xì)胞培養(yǎng)液預(yù)處理，對照組和細(xì)胞因子組細(xì)胞僅給予常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)液處理。實(shí)驗(yàn)處理階段，細(xì)胞因子組和序貫組細(xì)胞給予含IFN-γ(1000U/ml)和TNF-α(5ng/ml)的細(xì)胞培養(yǎng)液處理，拉米夫定組細(xì)胞繼續(xù)給予含拉米夫定(2μmol/L)的細(xì)胞培養(yǎng)液處理，對照組細(xì)胞仍僅給予常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)液處理。隔天更新相應(yīng)的細(xì)胞培養(yǎng)液并分別收集實(shí)驗(yàn)處理2、4、6天

3、后的細(xì)胞培養(yǎng)液。實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈反應(yīng)(RealTimePCR)方法定量檢測細(xì)胞內(nèi)HBV共價(jià)閉合環(huán)狀DNA(HBVcccDNA)和HBVDNA，酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測細(xì)胞培養(yǎng)液上清中HBV表面抗原(HBsAg)和e抗原(HBeAg)，CCK-8檢測成活細(xì)胞，流式細(xì)胞儀AnnexinV-FITC/PI雙染細(xì)胞法檢測細(xì)胞凋亡。數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，比較不同細(xì)胞處理的抗HBV效果和細(xì)胞毒性。
　　結(jié)果：實(shí)驗(yàn)處理6天后，細(xì)胞內(nèi)HBV

4、cccDNA抑制率由強(qiáng)至弱依次為：細(xì)胞因子組(55.22％)、序貫組(44.61％)和拉米夫定組(31.09％)，三組之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差別，P<0.05，抑制率均高于對照組，P<0.05。細(xì)胞內(nèi)HBVDNA抑制率依次為：拉米夫定組(84.33％)、序貫組(67.84％)和細(xì)胞因子組(62.19％)，抑制率均高于對照組，P<0.05。序貫組和細(xì)胞因子組細(xì)胞內(nèi)HBVDNA抑制率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差別，P>0.05，均低于拉米夫定組，P<0.05。實(shí)驗(yàn)處理

5、6天后細(xì)胞培養(yǎng)液上清HBsAg抑制率出強(qiáng)至弱依次為：序貫組(33.73％)、細(xì)胞因子組(25.31％)和拉米夫定組(12.64％)，三組之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差別，P<0.05，抑制率均高于對照組，P<0.05；HBeAg抑制率由強(qiáng)至弱依次為：序貫組(31.94％)、細(xì)胞因子組(25.55％)和拉米夫定組(12.46％)，三組之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差別，P<0.05，抑制率均高于對照組，P<0.05。細(xì)胞成活力由高至低依次為：拉米夫定組(91.42％)、序

6、貫組(85.62％)和細(xì)胞因子組(57.54％)。序貫組和拉米夫定組細(xì)胞成活力無統(tǒng)計(jì)學(xué)差別，P>0.05，均高于細(xì)胞因子組，P<0.05。細(xì)胞凋亡率由高至低依次為：細(xì)胞因子組(6.17％)、序貫組(2.80％)和拉米夫定組(1.49％)，三組之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差別，P<0.05。細(xì)胞因子組和序貫組細(xì)胞凋亡率高于對照組，P<0.05。
　　結(jié)論：拉米夫定和IFN-γ、TNF-α序貫處理對HepG2.2.15細(xì)胞具有抗HBV作用，對HBVc