陰虛血瘀與羅漢果甜苷影響HSC活化及凋亡的相關性研究.pdf

1、目的：通過觀察羅漢果甜苷對體外HSC活化和凋亡的影響，以深入探討羅漢果甜苷抗肝纖維化的機理及陰虛血瘀與肝纖維化的關系，為探索羅漢果甜苷對肝纖維化影響的藥效強度及臨床實驗打下一定的基礎。
　　方法：采用HSC作為活化肝星狀細胞的研究模型，用CCK-8試劑盒檢測HSC增殖活性；分別通過實時定量RT-PCR和免疫細胞化學方法檢測不同濃度的羅漢果甜苷對HSC活化標志蛋白α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA) mRNA和蛋白表達水平的影響；并采用

2、實時定量RT-PCR和酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)法檢測HSC中I型膠原（COl-Ⅰ）和轉化生長因子β1(TGF-β1)的基因和蛋白分泌量。本研究還利用流式細胞儀（FCM）觀察羅漢果甜苷對HSC凋亡的影響。數(shù)值用均值±標準差（x±s）表示，兩組間的比較采用方差分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　結果：CCK-8試劑盒檢測結果顯示，不同濃度羅漢果甜苷可以抑制HSC的增殖，且隨藥物濃度增高（從80?g/ml到320?g/ml

3、），其抑制作用逐漸增強，由5.32%逐漸上升至50.1%。流式細胞儀檢測結果表明，羅漢果甜苷可以促進LX-2凋亡，隨羅漢果甜苷濃度增加，凋亡率逐漸升高，各組（80?g/ml、160?g/ml、240?g/ml、320?g/ml）依次為7.70±0.30%、10.16±0.23%、14.33±0.25%、16.53±0.41%，與對照組比較有統(tǒng)計學意義。采用免疫細胞化學方法觀察α-SMA表達水平，與對照組比較，給藥組α-SMA的表達明顯減

4、少，棕褐色區(qū)域分布少，著色淺，且藥物濃度升高降低更明顯。ELISA法檢測TGF-β1及COl-Ⅰ的表達水平，各組細胞培養(yǎng)液上清中TGF-β1及COl-Ⅰ的含量均低于對照組，并且均隨藥物濃度升高而下降，差異有統(tǒng)計學意義。實時定量 RT-PCR方法結果表明，各給藥組可降低HSC中TGF-β1基因表達，除80?g/ml藥物濃度干預后與對照組比較無明顯差異（P>0.05），余各組藥物濃度組與對照組比較有明顯差異（P<0.05）；且各給藥組可明顯

5、降低 HSC中α-SMA和COl-Ⅰ的基因表達，與對照組比較差異具有顯著性（P<0.05或P<0.01）。
　　結論：①羅漢果甜苷可濃度依賴性（80?g/ml-320?g/ml）抑制人肝星狀細胞活化——抑制其增殖，降低其活化標志α-SMA基因和蛋白表達；②羅漢果甜苷可濃度依賴性（80-320?g/ml）抑制活化人肝星狀細胞的功能——降低其分泌和表達TGF-β1及COl-Ⅰ；③羅漢果甜苷可濃度依賴性（80?g/ml-320?g/ml