23254.羅漢果總苷的微生物轉(zhuǎn)化研究

1、上海師范大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要摘要羅漢果總苷是一類主要由葫蘆素烷三萜類皂苷組成的有效部位，迄今為止，在羅漢果的不同部位已經(jīng)分離純化得到了12種葫蘆烷三萜類化合物。因羅漢果總苷含糖配基的數(shù)量較多，極性大，人體不易吸收，故生物利用度很低。利用微生物產(chǎn)生的酶水解糖苷鍵脫掉部分糖配基可使其極性降低，從而提高糖苷類物質(zhì)的吸收率。本文對羅漢果總苷的微生物轉(zhuǎn)化進行了研究。采用一株產(chǎn)高活性13葡萄糖苷酶的青霉屬真菌J9對羅漢果總苷進行生物轉(zhuǎn)化。利用TLC

2、法分別對羅漢果總苷及其轉(zhuǎn)化產(chǎn)物進行鑒別，優(yōu)化其展開劑條件，確定展開劑的最佳配比為氯仿：甲醇：水=10：4：03。通過硅膠柱層析和C18反相柱層析分離純化得到了高純度轉(zhuǎn)化產(chǎn)物A、B和C。經(jīng)過熔點、比旋光度、質(zhì)譜、紫外光譜、紅外光譜和核磁共振的解析鑒定轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的化學(xué)結(jié)構(gòu)：A為羅漢果醇24一OD—D葡萄吡喃糖基。(1—2)13D葡萄吡喃糖苷；B為羅漢果醇3一Op一葡萄吡喃糖基24一O13D葡萄吡喃糖基一(1_2)p—D一葡萄吡喃糖苷；C為11

3、酮羅漢果醇3ODD葡萄吡喃糖基24O—p—D葡萄吡喃糖基(1_2)DD一葡萄吡喃糖苷，A、B、C三種化合物均未見文獻報道。通過色譜條件的優(yōu)化建立了同時測定轉(zhuǎn)化產(chǎn)物A、B的HPLC方法，色譜條件為：色譜柱為ZW&AC18(250x460mm，50m)，流動相為乙腈(A)一水(B)，梯度洗脫(0～15min，25％A’40％A；15～23min，40％A)，流速(0～15min，10ml／min’05ml／min；15～23min，05ml

4、／min)，柱溫為30℃，進樣量為51xl，檢測波長為203nm。化合物A和B的線性回歸方程分別為：Y=4599X02252，r=10000；Y=6425X2517，r=10000，線性范圍分別為099299299和0229～22999?；衔顰和B的加樣回收率分別為(993112％)、(9784168)％。為了提高青霉屬真菌J9對羅漢果總苷的轉(zhuǎn)化率，對其培養(yǎng)基組成和搖瓶發(fā)酵工藝條件進行了優(yōu)化，確定了發(fā)酵培養(yǎng)基的組成為：土豆20％(煎汁

5、)，玉米粉15％，麩皮15％，KH2P0402％。搖瓶發(fā)酵工藝條件為：培養(yǎng)基的初始pH值為6，底物濃度為5mg／mL，28℃、220r／min，搖瓶培養(yǎng)4天時產(chǎn)物B的轉(zhuǎn)化率最高，搖瓶培養(yǎng)7天時產(chǎn)物A的轉(zhuǎn)化率最高。AbstractMogrosidesaremadeupofcucubitanetriterpeneglycosides，SOfar12kindsofcucubitanetriterpeneshavebeenisolatedfro

6、mdifferentpartsofMomordicagrosvenoriSwingleBecauseMogrosidescontainmanyglycosylgroups，theyaredifficulttobeabsorbedandtheirbioavailabilityisaslowerasthatoftheotherpolarsaponinsHoweverenzymatichydrolysisthesepolarglycoside

7、scalldecreasetheirpolarandincreasetheirbioavailabilityThisarticlestudiedthemicrobialtransformationofcucubitanetriterpeneglycosidesfromMomordicagrosvenoriInthispaperwefoundapenicilliumspJ9whichCanproduce13glucosidasewithh

8、igheractivityanditisabletopartialhydrolysisthemogrosidesThemethodofTLCwagdiscussedforfindingasuitableconditiontoanalyzetransformationproductsAsaresult，theoptimaldevelopingsolventofTLCischloroform—methanol—water(10：4：03)T

9、hreehighpuritycompoundswereseparatedfromenzymatichydrolysatebySilicaGelColumnChromatographyandC18ReversedphaseColumnChromatographyThreeproductswereidentifiedasmogrol24一O—pD—glucopyranosyl一(1_2)一p—Dglucopyranoside(A)；mogr

10、ol3Op—glucopyranosyl一24一Op—D—glucopyranosyl一(1_2)p—Dglucopyranoside(B)；11一OXO—mogrol3Op—D—glucopyranosyl一24一O—pD—glucopyranosyl(1葉2)一p—D—glucopyranoside(C)bymeltingpoint，MS，IR，NMRThecompoundsA、BandChavenotbeenreportedThe

11、methodofHPLCfortheassayofthecontentoftransformationproductsAandBWasdevelopedZW&AC18(250X460mm，5rim)columnWasusedasthestationryphaseThemobilephaseWasacetonitrile：water(015rain，25％A40％A；1523min，40％A)；theflowrate(015min，10m