導(dǎo)致小鼠無毛突變的關(guān)鍵基因的定位和克隆以及在小鼠毛發(fā)發(fā)育中作用的研究.pdf

1、上海交通大學(xué)博士學(xué)位論文導(dǎo)致小鼠無毛突變的關(guān)鍵基因的定位和克隆以及在小鼠毛發(fā)發(fā)育中作用的研究姓名：滕曉坤申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：林志新20080601我們用原位雜交的方法確定了b r n c vm R N A 在皮膚中的表達主要位于表皮真皮層，以及毛囊內(nèi)。蛋白結(jié)構(gòu)預(yù)測顯示，U N C V 是一個7 次跨膜的蛋白。我們構(gòu)建了該基因的轉(zhuǎn)基因小鼠，通過與無毛小鼠的雜交實驗證實了在無毛小鼠體內(nèi)表達外源的U n c

2、v 能使無毛突變的小鼠產(chǎn)生表型回復(fù)。U n c v 純合突變的無毛小鼠同E g f 轉(zhuǎn)基因稀毛小鼠的雜交子一代中，同時高表達E g f , 并伴有f n c v 雜合缺失的子代小鼠的稀毛表型加重，胡須缺失，提示U N C V 蛋白參與了E G F ／E G F R 的信號通路對毛發(fā)發(fā)育周期的調(diào)控。W e s t e r nb l o t 結(jié)果顯示U n c v 突變小鼠皮膚中的E G F R 的磷酸化受到了影響，野生型，雜合子，純合子的

3、磷酸化程度依次遞減。在免疫組化實驗中，重點研究了U n c v 突變小鼠皮膚中E G F ／E G F R ，E r k ，R b ，C a s p a s e 一3 等蛋白的變化，發(fā)現(xiàn)其在毛囊的表達部位發(fā)生了改變，細(xì)胞實驗顯示U N C V 蛋白對E G F 信號具有放大作用，能提高E G F ／E G F R 復(fù)合體的穩(wěn)定性，同時也發(fā)現(xiàn)，U n c v 參與了一個E G F 家族成員E p i g e n 的前體剪切過程。該被毛突變