腹側(cè)黃色被毛小鼠的生物學(xué)特性及突變基因的染色體定位.pdf

1、腹側(cè)黃色被毛小鼠是中國(guó)科學(xué)院上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心工作人員在小鼠正常生產(chǎn)繁殖過程中發(fā)現(xiàn)的一種突變種小鼠，其遺傳背景為C57BL/6J(簡(jiǎn)稱B6)，最顯著的可見表型為頭頸軀干腹側(cè)面(從下頜至肛門)被覆黃色被毛，腹側(cè)與背側(cè)交界線清楚。本實(shí)驗(yàn)對(duì)腹側(cè)黃色被毛小鼠的生物學(xué)特性進(jìn)行了研究，并對(duì)突變基因進(jìn)行了染色體定位。具體研究?jī)?nèi)容分為以下兩部分：
　　 1.腹側(cè)黃色被毛小鼠的生物學(xué)特性。
　　 本實(shí)驗(yàn)所研究的腹側(cè)黃色被毛小鼠來(lái)源于自發(fā)性突

2、變，經(jīng)遺傳試驗(yàn)證實(shí)該突變符合單基因顯性遺傳的模式。組織病理學(xué)及組織化學(xué)研究發(fā)現(xiàn)腹側(cè)黃色被毛小鼠腹部表皮黑色素細(xì)胞數(shù)目及毛囊內(nèi)黑色素較其背景品系B6少，而背部與B6無(wú)明顯差別；黃色被毛小鼠毛發(fā)直接鏡檢，可見腹部毛發(fā)的顏色較B6淺，結(jié)構(gòu)正常，背部與B6無(wú)明顯差別；腹側(cè)黃色被毛小鼠腎臟臟器系數(shù)較正常B6小鼠大，差異呈極顯著性(P＜0.01)；突變小鼠的血糖值，雄性為7.64±0.820mmol/L，雌性為7.46±0.992mmol/L，而背

3、景品系的雄性為2.14±0.532mmol/L，雌性為2.59±0.896mmol/L，兩者間差異呈極顯著性，其余指標(biāo)包括體重、各重要臟器病理切片及血液生理學(xué)未發(fā)現(xiàn)明顯異常，盡管我們尚未確定這些變化之間的內(nèi)部聯(lián)系，但腹側(cè)黃色被毛小鼠由于具有高血糖的特征，有可能被開發(fā)成為一個(gè)新型的糖尿病模型。到目前為止，腹側(cè)黃色被毛小鼠的模型特征與對(duì)應(yīng)的人類疾病尚未明確，但這些生物學(xué)數(shù)據(jù)將為突變基因的鑒定提供非常有用的線索。
　　 2.黃色被毛小

4、鼠突變基因的染色體定位。
　　 通過文獻(xiàn)查閱，參考前人的研究結(jié)果，本實(shí)驗(yàn)首先選取用于對(duì)突變基因進(jìn)行初步定位的39個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記，這些標(biāo)記基本平均分布于小鼠基因組，在B6及D2小鼠之間呈多態(tài)性且差異至少在4bp以上。同時(shí)，大量繁殖F2代小鼠并且優(yōu)先從第2、8號(hào)染色體開始對(duì)樣本進(jìn)行PCR擴(kuò)增，在對(duì)擴(kuò)增結(jié)果逐一連鎖分析后，將突變基因定位于第2號(hào)染色體上。然后，我們?cè)诳拷蛔兓虻母浇x取新的微衛(wèi)星標(biāo)記，通過這些微衛(wèi)星標(biāo)記將突變基因所在區(qū)

5、域進(jìn)一步減小到D2Mit307和D2Mit310之間約2.7 cM的范圍內(nèi)，在確定小鼠基因數(shù)據(jù)庫(kù)中已沒有合適的微衛(wèi)星位點(diǎn)可供使用之后，我們開始選擇SNP標(biāo)記，這些標(biāo)記必須在B6小鼠及D2小鼠間有堿基多態(tài)性，這種多態(tài)性能夠通過對(duì)PCR產(chǎn)物的測(cè)序進(jìn)行區(qū)分。在本實(shí)驗(yàn)中我們共使用了11個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記和3個(gè)SNP標(biāo)記，最終通過對(duì)196只F2小鼠的連鎖分析，將腹側(cè)黃色被毛小鼠的突變基因定位于第2號(hào)染色體距著絲粒149804749bp到15506076