MDV分離毒株生物學特性及其在宿主染色體整合的研究.pdf

1、雞馬立克氏病(MD)是一種雞的高度傳染性腫瘤病，該病以淋巴組織增生和腫瘤轉(zhuǎn)化為特征。MD病原為雞馬立克氏病病毒(MDV)，MDV感染可以直接導致宿主死亡和生產(chǎn)性能降低，并且間接導致免疫抑制。MDV廣泛流行于世界各地養(yǎng)禽的國家和地區(qū)，對養(yǎng)禽業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失。MD的防控手段主要是疫苗免疫預防，但是MD疫苗并不能誘導清除性免疫，MDV野毒株和疫苗株可以共存于宿主體內(nèi)，并不斷復制和排毒，導致MDV野毒株的不斷進化。雖然我國實行MD普遍免疫

2、，但近年來各地常有MD發(fā)生，給養(yǎng)禽業(yè)造成巨大危害。因此有必要了解我國MDV的流行情況，并對MDV野毒株進行分離鑒定，進一步研究其生物學特性，分析其進化規(guī)律。這些研究對于MDV的基礎研究和MD防控均有重要意義。
　　本研究中，我們對2015年8月至2016年7月收到的來自15省份的489份臨床疑似MD病料進行了檢測，MDV陽性率達到42.7％，MDV陽性病料中混合感染禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生征病毒(REV)、禽傳染性貧血病毒(CIAV)和

3、禽白血病病毒(ALV)的占比分別為12.6％、17.5％和1.8％。對部分MDV單獨陽性的病料進行病原的分離鑒定，獲得4株MDV細胞適應毒株，分別命名為BC/15、HLD/16、JL/16和SY/15。PCR鑒定發(fā)現(xiàn)BC/15和HLD/16具有MDV野毒株特點，而JL/16和SY/15具有MDV疫苗或弱毒株特征?；趍eq基因的遺傳進化分析發(fā)現(xiàn)，BC/15和HLD/16與絕大多數(shù)MDV中國分離致病毒株處于同一進化分支，并且兩者單獨形成新

4、的進化分支;而JL/16和SY/15與早期中國分離毒株J-1、疫苗株CVI988和814以及弱毒株CU-2處于同一近化分支。這些結(jié)果表明具有不同遺傳特征的MDV毒株在我國流行，且MDV毒株依然在不斷進化。
　　2015年，本實驗室于吉林省一個CVI988疫苗免疫后發(fā)生MD的雞群中分離得到一株MDV毒株BS/15。通過PCR和IFA鑒定發(fā)現(xiàn)MDV BS/15具有MDV野毒株特征，進一步對其meq、vIL-8、pp38和ICP4等4個

5、致病相關基因進行序列對比發(fā)現(xiàn)MDV BS/15符合中國分離致病毒株的遺傳特征，擁有多個MDV中國分離毒株特有的突變。為了研究BS/15的致病性以及評價疫苗對其保護效果，我們比較了MDV BS/15和MDV參考毒株-超強毒(vvMDV) Md5在SPF雞中的致病性，并比較評價了在我國應用最廣泛的CVI988和814疫苗對這兩個毒株的保護效果。結(jié)果表明，在攻毒后90 d試驗期內(nèi)，MDV BS/15和Md5都能導致100％SPF雞發(fā)生MD，兩

6、者引起的死亡率相似，分別為85.7％和80.0％。MDV BS/15攻毒組腫瘤率達到64.3％，高于Md5攻毒組40.0％的腫瘤率。但是相對于Md5感染雞，BS/15感染雞的存活時間更長，生長發(fā)育障礙較輕微，免疫器官損傷程度相似。這些結(jié)果表明MDV BS/15毒力與Md5大致相似，但是其致病特征發(fā)生改變。值得關注的是，CVI988和814疫苗對BS/15的保護指數(shù)分別為33.3和66.7，而兩種疫苗對Md5的保護指數(shù)分別為92.9和10

7、0。這表明兩種疫苗雖然對超強毒力的Md5保護效果良好，但都不能對BS/15提供足夠的保護，尤其是CVI988疫苗。這些數(shù)據(jù)MDVBS/15具有“延遲毒力”和超高疫苗抗性的特征。該研究表明我國存在MDV變異毒株，這些毒株的流行可能是現(xiàn)地MD免疫失敗的原因之一。該研究能夠幫助我們了解我國MDV流行毒株的致病特征和進化特征。
　　本研究中分析了MDV感染雞中樞免疫器官干擾素的表達，并首次比較分析了不同MDV毒株(BS/15和Md5)感染

8、雞中宿主干擾素的差異表達。研究發(fā)現(xiàn)MDV感染可顯著抑制SPF雞法氏囊和胸腺中IFN-α和IFN-β的表達。在MDV感染前期IFN-γ顯著上調(diào)表達，而后IFN-γ顯著下調(diào)表達，這些結(jié)果表明MDV能夠影響宿主先天免疫系統(tǒng)并抑制干擾素表達，從而逃避宿主抗病毒作用。另外，不同MDV毒株感染對宿主干擾素差異表達的影響作用顯著不同，這可能與MDV毒株之間不同的致病特征和疫苗抗性具有一定相關性。
　　為了進一步分析不同毒株的感染進程，本研究建立

9、了檢測MDV基因組在宿主染色體整合的熒光原位雜交方法(FISH)，檢測了體內(nèi)感染模型中MDV基因組在宿主染色體中的整合情況，首次分析了不同MDV毒株（BS/15和Md5）在宿主染色體整合的規(guī)律。結(jié)果表明不同MDV毒株在宿主染色體中的整合規(guī)律不同。綜合MDV BS/15和Md5致病性的研究結(jié)果，提示不同MDV毒株在宿主染色體中整合能力的差異與其致病特征具有一定的相關性。
　　綜上所述，本研究對我國部分MDV流行毒株進行了檢測、分離、