脂代謝關(guān)聯(lián)基因多態(tài)性與高脂血癥風(fēng)險(xiǎn)性研究.pdf

1、背景與目的：
　　高脂血癥是指人體內(nèi)血漿脂質(zhì)代謝異常，包括血漿總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)水平升高以及高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)水平降低。高脂血癥是人群中的一種常見病和多發(fā)病,大量的臨床流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果表明，高血脂是高血壓、2型糖尿病、腦卒中、動(dòng)脈粥樣硬化和冠心病等多種慢性非傳染性疾病的重要危險(xiǎn)因素。
　　血脂水平與年齡、性別、職業(yè)、文化程度、經(jīng)濟(jì)條件以及不同地域的人群的生活飲食

2、習(xí)慣等諸多因素密切相關(guān)。調(diào)查發(fā)現(xiàn)我國(guó)居民的血脂水平存在明顯的地區(qū)性差異，并且總體低于西方人群的水平。血脂水平除受到環(huán)境因素影響外，還與個(gè)體的遺傳因素有關(guān),研究認(rèn)為高脂血癥是一種由遺傳和環(huán)境危險(xiǎn)因素共同作用的多基因性疾病。目前認(rèn)為環(huán)境因素是大多數(shù)疾病發(fā)生的始動(dòng)因素，而個(gè)人的遺傳特征決定疾病的易感性。單核苷酸點(diǎn)突變?cè)斐傻幕蚨鄳B(tài)性（SNP）是易感性的遺傳基礎(chǔ)，因此對(duì)于基因的SNP篩查和研究具有重要的理論及應(yīng)用價(jià)值。隨著單核苷酸多態(tài)性單體型圖

3、譜（HapMap）計(jì)劃的完成和基因芯片技術(shù)的發(fā)展，大大促進(jìn)了應(yīng)用全基因組關(guān)聯(lián)性研究(GWAS)的方法篩查與疾病相關(guān)SNP的發(fā)展。由于GWAS研究的樣本代表性問(wèn)題，所獲得的疾病關(guān)聯(lián)性位點(diǎn)的結(jié)果尚需在不同人群中進(jìn)行多中心的重復(fù)驗(yàn)證。為了解血脂代謝相關(guān)基因的變異對(duì)血脂水平的影響以及在發(fā)病機(jī)制方面提供更多的線索，我們重點(diǎn)對(duì)影響血脂代謝的相關(guān)基因進(jìn)行了檢索，選擇在GWAS結(jié)果中與血漿TG及LDL-C關(guān)聯(lián)的標(biāo)簽SNP，并且次要等位基因頻率大于5％，

4、尚未在東亞人群中驗(yàn)證的SNP來(lái)進(jìn)行研究。根據(jù)SNP檢測(cè)操作平臺(tái)對(duì)突變類型的要求，確定了12個(gè)SNPs位點(diǎn)，涉及8個(gè)基因或基因簇。
　　潮汕地處沿海，當(dāng)?shù)鼐用耖L(zhǎng)期以來(lái)有著自己獨(dú)特的傳統(tǒng)風(fēng)俗文化及生活飲食習(xí)慣。根據(jù)我們4年來(lái)的人群慢性病監(jiān)測(cè)發(fā)現(xiàn)，所監(jiān)測(cè)人群中30歲以上的居民血脂異常率高達(dá)40%以上，已成為危害當(dāng)?shù)厝巳航】档臐撛谕{。本研究以潮汕人群為研究對(duì)象，采用病例-對(duì)照的研究方法，對(duì)選取的12個(gè)SNPs位點(diǎn)采用高通量快速分型的方法

5、，篩查SNPs單核苷酸的突變頻率，描述各基因型在高脂血癥患者及對(duì)照人群中的分布，闡述各等位基因、基因型、基因-基因以及基因-環(huán)境之間的交互作用對(duì)該人群高脂血癥患病的風(fēng)險(xiǎn)性。通過(guò)篩查脂代謝相關(guān)基因的SNPs，尋找有效的治療靶點(diǎn)，并針對(duì)易感人群制定合適的防治教育模式，及早對(duì)疾病進(jìn)行有效的預(yù)防和控制。
　　對(duì)象和方法：
　　采用整群抽樣的方法，抽取2010年5月至2011年9月在潮南民生醫(yī)院和汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院體檢中心單位

6、集體體檢的居民作為研究對(duì)象。所有對(duì)象年齡18周歲以上，在潮汕地區(qū)常住5年及以上，漢族，且自愿參加調(diào)查且能夠合作者。
　　采用現(xiàn)場(chǎng)流行病學(xué)調(diào)查方法，經(jīng)本人同意后，由經(jīng)過(guò)訓(xùn)練的調(diào)查人員對(duì)調(diào)查對(duì)象逐一進(jìn)行體格檢查、問(wèn)卷調(diào)查和生化檢查。采用成組病例-對(duì)照研究方法，依據(jù)《2007年中國(guó)血脂防治指南》規(guī)定的血脂異常診斷標(biāo)準(zhǔn)入選高脂血癥的個(gè)體作為病例組，同時(shí)選取同期體檢的同一單位血脂正常且無(wú)服用降血脂藥史的個(gè)體作為對(duì)照組。獲得高脂血癥（HLP）

7、患者共1514例，其中男性1166人，女性348人，平均年齡44.7±11.8歲。HLP中，高甘油三酯(HTG)患者825例，高低密度脂蛋白(H-LDL)患者792例。血脂四項(xiàng)均正常的對(duì)象為對(duì)照組，共1073例，其中男性708人，女性365人，平均年齡為38.4±10.6歲。
　　樣本DNA提取采用酚氯仿方法抽提，采用GenomeLabTM SNPstream單核苷酸多態(tài)性分型系統(tǒng)進(jìn)行基因分型。數(shù)據(jù)經(jīng)錄入核查后，運(yùn)用SPSS13.

8、0和SAS9.1軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料采用(X±SD)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)描述，正態(tài)性檢驗(yàn)采用單樣本K-S擬合優(yōu)度法。病例-對(duì)照研究中兩組均數(shù)的比較采用 t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)描述，單個(gè)位點(diǎn)等位基因和基因型與表型的統(tǒng)計(jì)推斷采用χ2檢驗(yàn)。采用 SHEsis在線軟件分析基因型頻率分布的Hardy-Weinberg平衡。采用 Haploview4.0軟件對(duì)同一基因內(nèi)的不同位點(diǎn)間進(jìn)行連鎖不平衡分析。應(yīng)用Plink軟件建立二分類非條件Logist

9、ic回歸模型研究等位基因、基因型以及基因型的顯性模型和隱性模型與血脂異常的關(guān)系，檢驗(yàn)水準(zhǔn)取?=0.05/12=0.0042。采用多因子降維法(GMDR)分析基因-基因以及基因-環(huán)境之間的交互作用，顯著性檢驗(yàn)水準(zhǔn)取α=0.05。
　　結(jié)果：
　　1.除血漿HDL外，血脂異常人群中各項(xiàng)體格檢查指標(biāo)及生化指標(biāo)均值均高于正常人群相應(yīng)指標(biāo)均值(P<0.05)。
　　2.12個(gè)SNPs位點(diǎn)均被成功分型，平均分型成功率為99.68%

10、。對(duì)照組樣本中12個(gè)SNPs的基因型頻率分布全部符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05)。
　　3. APOA1/C3/A4/A5 rs1558861的次要等位基因、雜合子和次要等位基因純合子以及FADS1/2/3 rs174547位點(diǎn)次要等位基因純合子均分別有較高的HTG、H-LDL和HLP患病風(fēng)險(xiǎn)，而HMGCR rs12916位點(diǎn)的雜合子、APOA1/C3/A4/A5 rs4938303的次要等位基因的純合子的風(fēng)險(xiǎn)

11、較低。LPL rs326的次要等位基因HTG的患病風(fēng)險(xiǎn)較低，該位點(diǎn)的次要等位基因純合子和雜合子 HLP的患病風(fēng)險(xiǎn)較低。APOA1/C3/A4/A5 rs4938303位點(diǎn)、PSRC1/CELSR2/SORT1 rs599839位點(diǎn)和HMGCR rs3846662位點(diǎn)的次要等位基因的H-LDL的風(fēng)險(xiǎn)較低。
　　4. HMGCR基因內(nèi)的單倍型G-T-C的H-LDL風(fēng)險(xiǎn)較高；單倍型A-C-C的H-LDL和HLP風(fēng)險(xiǎn)較低。FADS1/2/

12、3基因簇的單倍型C-T以及APOA1/C3/A4/A5基因簇的單倍型C-C的HTG、H-LDL和HLP風(fēng)險(xiǎn)較高，而另外的單倍型 C-C及 T-T的風(fēng)險(xiǎn)較低。APOA1/C3/A4/A5基因簇的單倍型T-C的HTG風(fēng)險(xiǎn)較低。
　　5．APOA1/C3/A4/A5 rs1558861位點(diǎn)的基因型為CC與APOE rs157580位點(diǎn)的基因型為AA+AG時(shí)，HTG的患病風(fēng)險(xiǎn)最高(OR=5.6，P<0.001)。rs1558861位點(diǎn)的基

13、因型為CC，而FADS1/2/3 rs174547位點(diǎn)的基因型為 TT時(shí)，H-LDL和HLP的患病風(fēng)險(xiǎn)最高(OR=11.3， P=0.047；OR=11.8，P=0.002)。
　　6. HTG組中，rs174570、rs11206510、rs4938303、rs157580、rs12916、rs599839、rs714052和rs326八個(gè)位點(diǎn)分別與肉類攝入，rs174547和rs1558861分別與坐位時(shí)間，rs3846662

14、和rs3846663分別與淡水魚攝入存在交互作用。H-LDL組中，rs174547、rs11206510、rs4938303、rs1558861、rs157580和rs326六個(gè)位點(diǎn)分別與高血壓，rs12916和rs714052分別與坐位時(shí)間，rs3846662和rs3846663分別與飲茶之間存在交互作用。
　　結(jié)論：
　　1.12個(gè)來(lái)自 GWAS血脂關(guān)聯(lián)的標(biāo)簽 SNPs中，發(fā)現(xiàn)有7個(gè)在潮汕人群中與HTG和H-LDL存在相

15、關(guān)性。
　　2. rs1558861、rs174547和rs4938303位點(diǎn)與HTG、H-LDL和HLP相關(guān)。rs326位點(diǎn)HTG和HLP相關(guān)；rs12916位點(diǎn)與H-LDL和HLP相關(guān)。 rs3846662和rs599839位點(diǎn)與H-LDL相關(guān)。
　　3. HMGCR基因內(nèi)單倍型G-T-C和A-C-C，APOA1/C3/A4/A5基因簇的單倍型C-C和T-T，F(xiàn)ADS1/2/3基因簇單倍型C-T和C-C均與HTG、H-L