htrA、clpP基因?qū)ψ儺愭溓蚓L(zhǎng)和耐酸性影響.pdf

1、目的:研究htrA、clpP基因缺失對(duì)變異鏈球菌生長(zhǎng)及耐酸性影響。
　　方法:利用變異鏈球菌標(biāo)準(zhǔn)株及前期實(shí)驗(yàn)成功構(gòu)建的htrA單基因缺陷株、clpP單基因缺陷株及htrA-clpP雙基因缺陷株，測(cè)定4種菌株在正常培養(yǎng)條件下不同時(shí)間段的吸光度，采用MTT試驗(yàn)測(cè)定4種菌株在不同時(shí)間段的甲臜吸光度變化情況并探究其與平板活菌計(jì)數(shù)法所得的活菌量之間關(guān)系；將4種菌株培養(yǎng)至對(duì)數(shù)中期，分成兩組，一組作為實(shí)驗(yàn)組進(jìn)行5小時(shí)預(yù)酸化處理(pH=5.5)，

2、一組作為對(duì)照組在普通TPY培養(yǎng)液中進(jìn)行5小時(shí)處理，然后將兩組菌株在致死性酸環(huán)境(pH=3.0)處理3小時(shí)，每隔1小時(shí)取菌液采用平板活菌計(jì)數(shù)法測(cè)定活菌數(shù)，計(jì)算得到生存率，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果:1.在正常營(yíng)養(yǎng)條件下，標(biāo)準(zhǔn)株的生長(zhǎng)快于htrA、htrA-clpP缺陷株(P<0.05)，除3-4小時(shí)外標(biāo)準(zhǔn)株與clpP缺陷株生長(zhǎng)無明顯差異(P>0.05)，clpP缺陷株生長(zhǎng)快于其他兩種缺陷株(P<0.05)，但htrA缺陷株與htrA-c

3、lpP缺陷株生長(zhǎng)無明顯差異(P>0.05)；2.未經(jīng)預(yù)酸化理4種菌株的生存率中，3小時(shí)內(nèi)，標(biāo)準(zhǔn)株、htrA單基因缺陷株和clpP單基因缺陷株的生存率并無明顯差異(P>0.05)，而htrA-clpP雙基因缺陷株變化明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，預(yù)酸化處理后，與標(biāo)準(zhǔn)株相比，htrA單基因缺陷株、clpP單基因缺陷株及htrA-clpP雙基因缺陷株的生存率都有下降(P<0.05)；3種缺陷株相比生存率差異沒有明顯差異(P>0.05

4、)，預(yù)酸化處理的標(biāo)準(zhǔn)株和htrA單基因缺陷株、htrA-clpP雙基因缺陷株生存率均明顯高于未經(jīng)預(yù)酸化處理(P<0.05)，預(yù)酸化處理對(duì)生存率的影響大于兩種基因缺失(P<0.05)。
　　結(jié)論:1.本實(shí)驗(yàn)中htrA、clpP缺失均可抑制變異鏈球菌的生長(zhǎng)，并且雙基因缺陷對(duì)細(xì)菌生長(zhǎng)抑制作用與htrA單獨(dú)缺失相似，MTT試驗(yàn)可在一定的菌數(shù)范圍內(nèi)反映標(biāo)準(zhǔn)株與三種缺陷株的活菌數(shù)；2.與變異鏈球菌標(biāo)準(zhǔn)株相比，htrA、clpP基因單獨(dú)或同時(shí)缺