重組人肝再生增強因子對5-6腎切除大鼠模型腎臟保護作用的研究.pdf

1、目的:近年國內外對重組人肝再生增強因子(rhALR)研究多集中在肝臟,它可以促進肝臟再生、抗肝纖維化、抑制NK細胞活性等。因其在各組織器官中分布廣泛,其mRNA在睪丸組織、肝臟、腎臟、胸腺等器官均有表達,不同的發(fā)育階段及其在組織分布上的差異,充分說明了rhALR生物功能的多樣性。研究發(fā)現rhALR可以促進細胞外基質的降解,發(fā)揮其抗肝纖維化作用,減輕肝細胞的損傷,促進損傷肝細胞的恢復,減輕細胞外基質的過度積聚。根據慢性腎臟病與肝臟病的發(fā)生

2、發(fā)展過程中存在某些相似的途徑,推測其對于慢性腎衰竭腎臟具有保護作用。國內外研究已證實rhALR直接或間接參與腎炎病理過程,急性腎小管損傷時刺激小管上皮細胞DNA合成等,但目前尚缺乏其在慢性腎衰竭的治療方面的研究。本課題擬在通過給予重組肝再生增強因子,同時觀察與慢性腎衰竭具有明確相關性的因子、蛋白的變化,以了解給予重組肝再生增強因子對于慢性腎衰竭的保護作用,為臨床治療提供新的思路。
　　 腎纖維化作為許多腎臟疾病的結局,是慢性腎衰

3、竭的病理基礎。腎纖維化包括腎小球硬化和腎間質纖維化兩個方面。作為慢性腎衰竭的終末期表現,其程度直接關系到慢性腎衰竭的程度及預后。腎小球硬化形成的主要原因是細胞外基質在腎小球基底膜過度沉積,突出表現為細胞外基質增加和腎固有細胞增生或消失。腎間質纖維主要表現為腎小管萎縮消失,腎間質單個核細胞浸潤和纖維硬化。有關研究表明,血小板生長因子(PDGF)是由血小板、單核巨噬細胞、腎小球系膜細胞(GMCs)和腎小管上皮細胞分泌的多肽因子。其家族包括P

4、DGF-AA、BB、CC和DD,其中PDGF-BB在腎小球硬化中作用尤為重要。其主要的生理作用是促進DNA合成,在病理狀態(tài)下由單核巨噬細胞和腎組織固有細胞過度分泌,通過促進GMCs增殖與分泌細胞外基質(ECM)增多,與轉化生長因子-β(TGF-β)發(fā)揮協(xié)同作用等途徑,從而導致腎小球硬化的發(fā)生。在腎小管上皮-間充質細胞轉化過程中,腎小管上皮細胞逐漸失去原有形態(tài),而表現出成纖維細胞的特征,如表達平滑肌肌動蛋白(a-SMA)增加;同時細胞外基

5、質不斷更新和降解的動態(tài)平衡失調,腎小管上皮細胞向間質移行,通過刺激腎小管上皮細胞增殖,表型轉化或間質成纖維細胞增殖,進而導致過度分泌Ⅲ型膠原,使細胞外基質過度聚積,從而導致腎間質纖維化。
　　 本課題擬在通過研究rhALR對5/6腎切除模型大鼠PDGF-BB、a-SMA和Ⅲ型膠原表達的影響,從而探討其對5/6腎切除模型大鼠腎臟的保護作用。
　　 方法:
　　 隨機分為三組,假手術組(n=20),僅暴露腎包膜,不做

6、腎切除。手術組(n=40),在嚴格無菌條件下,切除右腎,一周后切除左腎2/3。手術組大鼠術后飼養(yǎng)一周后,隨機分為對照組(n=20),干預組(n=20)。干預組大鼠于手術后12周給予rhALR200μg/kg/d,腹腔注射,連續(xù)注射14天。于用藥結束后24小時殺死動物,留取腎臟組織。
　　 檢測項目:1應用血生化測定儀測定不同組肌酐、尿素氮值。2HE、Masson染色,光鏡下觀察腎臟病理學改變。3免疫組織化學法檢測PDGF-BB蛋

7、白、腎間質平滑肌肌動蛋白(a-SMA)、Ⅲ型膠原。4.Western印跡法檢測腎組織中PDGF-BB蛋白、腎間質平滑肌肌動蛋白(a-SMA)、Ⅲ型膠原表達。
　　 所有計量數據以-x±s表示,行正態(tài)性檢測及方差齊性檢驗,統(tǒng)計學處理組間比較應用多個樣本的Q檢驗,統(tǒng)計學分析通過SPSS13.0 forWindows軟件完成。
　　 結果:
　　 光鏡下假手術組腎小球、腎小管結構正常。對照組可見多個腎小球硬化,系膜區(qū)增

8、寬,系膜細胞明顯增生,病變腎小球周圍小管上皮細胞腫脹明顯或者萎縮,基底膜明顯增厚皺縮,腎間質纖維化明顯。干預組系膜細胞增生較輕,纖維化程度較對照組明顯減輕。免疫組織化學:假手術組腎組織PDGF-BB蛋白極少表達,對照組和干預組較假手術組均增強,均具有顯著差異(P＜0.05);假手術組腎組織a-SMA蛋白僅在腎小動脈壁表達,腎小球和腎間質幾乎無表達。對照組和干預組腎小球內、腎小管和腎間質均可見陽性表達,與假手術組比較具有顯著差異(P＜0.

9、05);假手術組腎組織Ⅲ型膠原在腎小管上皮和間質少量沉積,對照組和干預組腎小管和腎間質Ⅲ型膠原沉積成條索狀或小片狀分布,較假手術組表達顯著增強,具有顯著差異(P＜0.05)。3項指標干預組較對照組明顯減弱,具有顯著差異(P＜0.05)。Western-blot結果:假手術組腎組織PDGF-BB蛋白極少表達,對照組和干預組表達均明顯增強,具有顯著差異(P＜0.05):假手術組腎組織a-SMA表達較少。對照組和干預組表達量明顯增強,具有顯著